Notch信號調控DC-T細胞間IS形成的機制研究

中文摘要

免疫突觸(IS)是T細胞與抗原提呈細胞(APC)相互接觸形成的動態超微結構。IS在調控T細胞免疫中發揮重要作用，但IS形成的調控機制仍不十分清楚。Notch信號在進化中高度保守，調節機體多種生理病理過程。本課題組報導了RBP-J敲除小鼠樹突狀細胞(DC)活化T細胞能力減弱，最終影響其抗腫瘤功能。由於IS的有效形成對T細胞活化十分關鍵，Notch缺失引起的T細胞活化和抗腫瘤功能減弱是否與IS形成相關呢？最近我們發現：RBP-J敲除小鼠DC與T細胞IS形成出現障礙，且DC內細胞骨架F-actin等極化減弱，強烈提示Notch信號可能參與了IS形成調控。本項目擬在前期研究基礎上，採用RBP-J敲除小鼠模型，研究Notch信號阻斷對DC-T細胞間IS形成的影響，探索調控IS形成的分子機制，初步闡明Notch信號對DC-T細胞間IS形成的調控作用，為深入理解IS形成的調控及功能提供新的實驗室證據。

結題摘要

通過小鼠BMDC與T細胞共培養模型，發現Notch 缺失可顯著影響BMDC-T 間免疫突觸（IS）形成。體內外研究證實，Notch缺失可能通過阻礙DC內IS側骨架蛋白（F-actin、Vinculin、Tubulin）極化重組及MHC II分子的極化影響IS形成。我們將RBP-J-/+BMDC與RBP-J-/-BMDC進行microRNA晶片檢測並qPCR驗證發現，miR-327、miR-467b-3p、miR-5132-5p、miR-546變化趨勢穩定。通過生物信息學發現miR-327、miR-467b-3p、miR-546存在與骨架蛋白相關靶基因（CORO2B、Tubgcp5、GJA5和MICAL3）。目前正著手研究上述miR是否通過調控這些靶基因影響DC內骨架蛋白極化重組及IS形成。通過將野生小鼠骨髓細胞與OP9-DL1共培養以活化Notch信號，並用GM-CSF和IL-4誘導培養為BMDC。發現，OP9-DL1共培養可促進DC分化，上調DC表面MHC I和MHC II的表達，促進IL-6、IL-12和TNF-α分泌，減少IL-10分泌，上調DC表面CXCR4和CCR7表達，促進其遷移，增強其對T細胞的活化能力，促進T細胞分泌IL-4和IFN-γ以及對腫瘤細胞的殺傷，最終抑制B16細胞在小鼠體內的生長。進一步研究發現：RBP-J-/-BMDC 內鈣離子濃度顯著低於對照。提示鈣離子可能在Notch對IS形成的調控中發揮了作用。我們用qPCR 檢測BMDC 部分Wnt 受體表達情況。發現，RBP-J-/-BMDC 大多數Wnt 受體表達下調。提示，Notch信號缺失下調了Wnt 受體，可能進而影響細胞內鈣離子水平。我們還發現，LPS和Poly(I:C)可顯著上調RBP-J-/+BMDC的Dll1水平，而不能顯著上調RBP-J-/-BMDC的Dll1水平。Poly(I:C)和LPS均可顯著上調RBP-J-/+BMDC和RBP-J-/-BMDC的Dll4和Jagged1的水平，但RBP-J-/+BMDC的Dll4和Jagged1的上調程度要顯著高於對照。進而，我們探索了Notch缺失對不同TLR介導的DC活化和功能的影響。發現Notch信號缺失對LPS和Poly(I:C)誘導的DC的細胞因子分泌、T細胞活化和活化T細胞的細胞因子分泌的影響是一致的，但是程度不同。

Notch信號調控DC-T細胞間IS形成的機制研究

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