《Wnt/β-catenin/LEF1信號通路通過Rbp-jκ調節結腸癌發生髮展的機制研究》是依託西安交通大學,由王文娟擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名:Wnt/β-catenin/LEF1信號通路通過Rbp-jκ調節結腸癌發生髮展的機制研究
- 項目類別:青年科學基金項目
- 項目負責人:王文娟
- 依託單位:西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
研究表明Wnt/β-catenin/LEF1通路參與結腸癌發生髮展,Notch通路異常激活是結腸癌誘發因素之一。我們前期研究發現:LEF1下調抑制結腸癌增殖、侵襲和轉移,並調節Notch通路轉錄因子RBP-jκ表達,影響其啟動子活性。提示Wnt通路與Notch通路在結腸癌發生髮展中存在相互作用,但具體機制不明。本研究擬利用LEF1敲除小鼠及AOM誘導小鼠原位結腸癌模型等手段,全面分析Wnt/β-catenin/LEF1通路相關分子與RBP-jκ在結腸癌中表達的關係,探討Wnt/β-catenin/LEF1通路調控RBP-jκ表達的機制及參與調節的下游分子。通過RBP-jκ對結腸癌細胞生物學行為影響的檢測,試證實Wnt/β-catenin/LEF1通路通過其與Notch通路發生互動作用,共同參與結腸癌的發生髮展過程,為深入理解結腸癌的發病機制,探尋結腸癌治療的新靶點提供一定的理論依據。
結題摘要
背景:我們的前期研究發現沉默結腸癌細胞中LEF1的表達可以下調RBP-Jκ的表達,同時LEF1可以促進結腸癌細胞增殖、抑制凋亡並增強其侵襲遷移能力。 方法:通過構建報告基因質粒驗證LEF1對RBP-Jκ的轉錄調控作用。通過AOM構建小鼠結腸癌模型,利用Western blot、real time PCR及免疫組化的方法檢測小鼠結腸癌形成過程中結腸組織中RBP-Jκ的表達。分別構建RBP-Jκ沉默的RKO細胞和RBP-Jκ過表達的SW480細胞,通過MTT法和流式細胞儀分別檢測各結腸癌細胞的增殖能力及凋亡比例。體外誘導腫瘤相關巨噬細胞的形成,並進行不同的處理,與不同處理的結腸癌細胞共培養,通過Transwell小室模型檢測各共培養系中結腸癌細胞的遷移及侵襲能力,Western blot的方法檢測EMT相關指標、的表達。對RBP-Jκ沉默的RKO細胞及其對照組細胞進行轉錄本測序,篩選分析出差異基因,並進行體外驗證。收集人結腸癌組織,利用免疫組化的方法檢測相關指標的表達,並結合臨床指標進行相關性分析。 結果:LEF1可以結合在RBP-Jκ上游非轉錄區,並促進RBP-Jκ的轉錄。在AOM誘導小鼠形成結腸癌的過程中RBP-Jκ的表達逐漸增加。RBP-Jκ可以促進結腸癌細胞的增殖、抑制其凋亡並增強其侵襲性遷移能力。RBP-Jκ可以通過Smad3通路促進結腸癌細胞發生EMT及增強其侵襲遷移能力。腫瘤相關巨噬細胞可以通過分泌TGF-β促進結腸癌細胞發生EMT並增強其侵襲遷移能力。RBP-Jκ可以通過分泌CXCL11增強腫瘤相關巨噬細胞促結腸癌細胞EMT及侵襲遷移的作用。人結腸癌組織中RBP-Jκ和CD163的表達呈正相關,上述二者的表達和E-Cadherin的表達呈負相關。 結論:上述研究說明Wnt通路和Notch通路可以通過LEF1和RBP-Jκ實現交叉調控,並且RBP-Jκ具有促癌的作用。同時RBP-Jκ一方面可以直接調控結腸癌細胞的EMT過程及侵襲遷移能力,另一方面可以通過腫瘤相關巨噬細胞進一步調控結腸癌細胞的EMT過程及侵襲遷移能力。