Notch1信號通路在HBx致肝細胞惡性轉化中的作用及機制研究

《Notch1信號通路在HBx致肝細胞惡性轉化中的作用及機制研究》是依託華中科技大學，由程斌擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Notch1信號通路在HBx致肝細胞惡性轉化中的作用及機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：程斌
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

B肝病毒x(HBx)可通過反式活化作用激活一系列信號通路調控細胞增殖與凋亡、抑制DNA修復等參與肝癌發生機制，Notch信號通路在細胞分化、增殖、凋亡和腫瘤發生中起關鍵作用。在前期HBx轉基因細胞證實HBx致肝細胞惡性轉化及發現HBx對宿主基因如DNA修復酶等表達的調控作用基礎上，本項目擬深入研究HBx基因轉染後對L02細胞Notch信號通路分子Notch1、NICD和Jagged1的影響；著重觀察RNA干擾(RNAi)阻斷Notch1信號通路後L02/HBx的細胞生物學特性及相關的細胞周期與凋亡調控基因表達的改變；並套用電泳遷移率變動分析法研究Notch1和另一重要信號通路NF-κB 間的串話作用及其與HBx致肝細胞惡性轉化的關係。旨在從Notch1信號通路這一新的角度探討HBx致肝細胞惡性轉化的分子機制，可望為建立新的B肝相關性肝癌治療模式-腫瘤信號傳導干預治療提供實驗基礎和理論依據。

結題摘要

B肝病毒X蛋白（HBx）在肝細胞癌（HCC）的發生過程中起重要作用，可通過多種途徑和方式參與HCC的發生和發展，其中通過結合不同的信號分子激活相應的信號通路干擾細胞周期的正常調控是最重要的機制之一。Notch信號通路是一條高度保守的信號通路，通過影響細胞的增殖、凋亡及幹細胞的更新、分化等在多種組織和細胞的發育中起關鍵作用。但其在HBx致HCC中的作用國內外鮮有報導。本課題通過實時定量RT-PCR 和Western Blot檢測發現前期構建的穩定轉染HBx的L02/HBx細胞與對照組相比，Notch1信號通路成員包括配體Jagged-1、受體Notch-1的胞內段NICD及靶基因Hes-1的表達均顯著增高，提示HBx可活化Notch1信號通路。免疫共沉澱（IP）證實HBx與Notch1信號通路的作用方式可能為HBx直接或間接與NICD結合。然後採用RNAi技術成功構建了針對Notch1信號通路起穩定干擾效應的L02/HBx-shRNA1細胞株，發現Notch1信號通路干擾後細胞增殖減慢，細胞周期進程減緩，細胞凋亡增多；進一步採用實時定量RT-PCR 及Western Blot發現其細胞周期正向調控因子CyclinD1、CyclinE、CDK4、E2F1表達下調，負向調控因子p16、p21及pRb表達上調，細胞凋亡促進因子caspase-3、caspase-9表達升高，抑制因子Bcl-2表達降低；電泳遷移率變動分析法（EMSA）檢測發現L02/HBx-Notch1 shRNA1細胞中NF-κB 結合能力降低，提示Notch1與NF-κB信號通路之間可能存在串話作用。總之，本課題研究發現HBx可能通過結合Notch1的胞內段NICD而激活Notch1信號通路，進而調控細胞周期及凋亡調控因子的表達而參與肝細胞的惡性轉化，在此過程中可能存在Notch1與NF-κB信號通路之間的串話。這些結果從Notch /Jagged信號通路這一新的角度進一步完善了HBx致肝細胞惡性轉化及癌變發生機制，同時建立了針對Notch1信號通路的RNAi干擾技術，為開創新的B肝相關性肝癌治療模式—腫瘤信號傳導干預治療提供了實驗基礎和理論依據；也為將來進一步從信號通路網路間串化及腫瘤幹細胞等方面深入研究Notch信號通路在HBx致肝細胞癌發生機制中的作用提供了線索。