《Notch通路在ITP患者Th17/Treg平衡失調中的作用及機制研究》是依託山東大學，由馬道新擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Notch通路在ITP患者Th17/Treg平衡失調中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：馬道新
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
輔助性T細胞(Th)平衡失調在特發性血小板減少性紫癜(ITP)發病中占重要地位；Th17和Treg為新近發現的Th細胞，在ITP中研究較少；我們前期發現ITP中存在Th17/Treg上調，在ITP中具重要效應，其分化調控機制日益受到重視。Notch通路是細胞分化調控中極為重要途徑，我們前期發現其在ITP中活性增高。本課題擬體外分離ITP CD4+ T細胞，測定Notch通路、Th17及Treg，進行相關性分析；干預Notch通路後，檢測CD4+T細胞向Th17及Treg分化、CD4+增殖及凋亡的影響。建立主動型ITP小鼠模型，檢測模型鼠Notch通路、Th17、Treg相關性；干預模型鼠Notch通路後，檢測對Th17、Treg亞群及相關基因影響，觀察臨床症狀減輕及改善情況。預期目標實現將會闡明Notch通路在ITP患者Th17/Treg失衡中的作用機制及治療意義，為ITP治療提供新靶點。
結題摘要
免疫性血小板減少症（ITP）是一種免疫介導的血小板破壞增多和生成減少而引起的自身免疫性疾病。輔助性T細胞（Th）免疫紊亂在ITP發病機制中占有重要地位，Th17和Treg是新近發現的Th亞群，Th17/Treg失衡會導致多種自身免疫性疾病，其分化調控機制日益受到重視。Notch通路是細胞分化調控的極為重要途徑，影響多種細胞的分化、增殖和凋亡，闡明其在ITP患者Th17/Treg失衡中的作用及機制具有重要意義。本研究以ITP患者和正常健康人為研究對象，採用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(PBMCs)、免疫磁珠分選CD3+ T 細胞。首先利用RT-PCR、Wester blot及免疫細胞化學方法，證實Notch通路分子在ITP中異常升高；同時套用流式細胞術、RT-PCR及ELISA發現，ITP患者中存在Th17、Tc17、Th22、Th1、Tc1、IL-21及轉錄因子RORγt的升高，Treg及轉錄因子Foxp3的降低，Th17/Treg及RORγt/Foxp3比值的升高。為探討ITP中Notch通路異常對Th17/Treg失衡的作用，我們使用DAPT抑制Notch通路，結果發現，抑制Notch通路後可降低ITP患者Th17、輕微升高Treg、糾正Th17/Treg比值失衡，還可降低ITP患者中Th17細胞因子IL-17及轉錄因子RORγt，而Treg相關細胞因子IL-10及轉錄因子Foxp3無明顯變化，抑制Notch通路後還可誘導ITP患者PBMCs凋亡，PBMCs的增殖無明顯改變。同時，我們還對Th17通路因子進行了干預，發現加入IL-17A或IL-21後，ITP患者PBMCs和CD3+T細胞中Th17百分比升高，Treg百分比、Treg/Th17比值及凋亡率降低，而經IL-17A抗體或IL-21抗體干預後，Th17百分比降低，Treg百分比、Treg/Th17比值及凋亡率升高。此外，體內實驗，我們建立了ITP小鼠模型，通過體內干預Notch通路，初步觀察到Th17/Treg失衡的逆轉以及ITP症狀的改善。本課題闡明了阻斷Notch通路對ITP的發病及治療意義，為ITP靶向治療提供了理論學依據和實驗室基礎。
