《Notch信號激活對成牙本質細胞凋亡的調控作用和機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由王勝朝擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Notch信號激活對成牙本質細胞凋亡的調控作用和機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王勝朝
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Notch信號決定細胞分化命運並調控細胞凋亡，成牙本質細胞(OB)是牙髓組織最關鍵細胞。我們研究發現牙髓損傷後OB細胞Notch表達被激活；Notch過表達可提高OB細胞系內毒素耐受性；提示Notch可能具有抗OB細胞凋亡作用。為深入探討Notch信號對OB細胞凋亡的調控作用和機制，本項目利用OB凋亡的細胞和動物模型，通過Notch信號增/抑控制(過表達/RNAi/Rbpj條件剔除)，採用流式細胞檢測、TUNEL法、凋亡與抗凋亡標誌基因表達實時定量分析、雷射共聚焦、凋亡細胞與Notch表達共顯色的組化分析等技術，系統研究Notch對OB細胞凋亡的調控作用；進而採用抗體晶片檢測Notch信號增/抑對OB細胞相關蛋白表達譜的改變深入分析其調控機制。項目對於闡明Notch信號在牙髓損傷修復中的作用、豐富對Notch信號與細胞凋亡關係的認識有重要意義，並可能為促進牙髓乃至機體損傷修復提供新思路。
結題摘要
我們前期研究推測Notch可能調控成牙本質細胞（OB）凋亡。本項目利用牙髓細胞損傷的細胞和動物模型，通過Notch信號增/抑控制，檢測Notch對OB細胞凋亡可能調控作用並分析可能機制。項目發現：LPS誘導MDPC-23細胞凋亡合適濃度為0.1μg/mL，合適時間為24~72h，作為OB細胞凋亡模型。Notch-1瞬時轉染MDPC-23細胞後，Notch-1基因及蛋白表達上調，為Notch信號在OB細胞凋亡中作用研究奠定基礎。流式細胞術，Hoechst染色及TUNEL染色檢測發現，Notch1過表達能夠促進LPS誘導的MDPC-23細胞的凋亡；Notch1過表達時：免疫細胞化學方法，Real-time PCR檢測發現抑凋亡基因及蛋白Bcl2表達下調；Western-blot檢測發現抑凋亡蛋白Bcl2表達下調，Caspase3表達趨勢與Bcl2一致。在DAPT作用下，Notch1及Hes1表達受到抑制，此時：流式細胞術檢測發現，LPS誘導的MDPC-23細胞凋亡率下降明顯；Hoechst染色劑及TUNEL染色檢測發現DAPT抑制LPS誘導的MDPC-23細胞的凋亡；免疫細胞化學、Real-time PCR和Western-blot檢測發現，抑凋亡基因及蛋白Bcl2表達上調；Caspase3表達下調。小鼠切牙機械損傷後免疫組織化學染色觀察Notch1、Notch2在成釉器細胞中的表達提示Notch信號參與成釉器細胞的功能調控，Notch信號激活與切牙損傷修復有關聯。小鼠切牙牙髓機械損傷後免疫組織化學染色觀察Notch1、Notch2在牙髓OB細胞中的表達提示Notch信號可能參與OB細胞的功能調控，Notch信號激活與牙髓組織的損傷修復有關聯。牙髓損傷動物模型TUNEL染色觀察、OB細胞凋亡標誌蛋白（Bcl2、caspase3）表達變化，也印證牙髓損傷後Notch信號激活參與細胞凋亡調控。綜上結果提示：Notch信號與牙齒損傷與修復過程關係密切，Notch信號通路在體外培養的OB細胞、動物牙齒損傷模型的成牙本質細胞、成釉器細胞表達激活；Notch細胞參與了成牙本質細胞、成釉器細胞的凋亡調控；Notch信號對凋亡的調控可能是通過影響凋亡調控基因Bcl2、caspase3的表達實現的。Notch信號對細胞凋亡的影響機制還需進一步研究。
