《miR-207促進肝癌侵襲與轉移的分子機制研究》是依託復旦大學，由祝繼敏擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-207促進肝癌侵襲與轉移的分子機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：祝繼敏
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
近年來，miRNA作為基因表達的調節子，引起了廣泛關注。大量研究表明，miRNA作為癌基因或抑癌基因，在腫瘤的發生、發展中發揮重要作用。我們前期的工作表明，肝癌細胞株中miR-207高表達，Prp19可能是其潛在的靶蛋白，然而其在肝癌發生髮展中的病理學作用卻尚不清楚。在另一項研究，我們發現在肝癌細胞株中，Prp19參與了Twist的降解。由此我們推測HCC中，miR-207通過調控靶蛋白Prp19,影響Twist等EMT主要標誌物及其下游基因表達，出現細胞生長、轉移和侵襲的顯型，進而促進肝癌侵襲轉移。本課題擬在體內和體外對miR-207影響Prp19和Twist通路進行研究。本項研究將有助於闡明HCC新的發病原因，並為HCC治療提供新方向。此外，本工作還有助於闡明泛素化和上皮間質轉化的聯繫。
結題摘要
目的：在肝癌組織和細胞系中檢測miR-19a-3p的表達水平；探討miR-19a-3p對肝癌細胞系生物學功能的影響以及潛在機制和對索拉菲尼敏感性中的作用以及潛在機制。 方法：實時螢光定量PCR檢測miR-19a-3p的表達水平；在細胞水平通過CCK-8等實驗研究miR-19a-3p對肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響；3.預測資料庫尋找miR-19a-3p的靶基因，並驗證其靶點及蛋白表達；CCK-8檢測肝癌細胞對索拉菲尼的反應。 結果：miR-19a-3p在肝癌臨床標本和肝癌細胞系中高表達；PLC/PRF/5細胞系過表達miR-19a-3p可促進細胞增殖、遷移和侵襲，Hep3B細胞系抑制miR-19a-3p表達抑制增殖、遷移和侵襲；雙螢光素酶報告實驗顯示：過表達miR-19a-3使得野生型螢光素酶報告基因活性明顯下降，而對突變型螢光素酶報告基因活性無明顯影響；抑制miR-19a-3p使野生型螢光素酶報告基因活性明顯增強，而對突變型螢光素酶報告基因活性無明顯影響。此外，在PLC/PRF/5細胞系中過表達miR-19a-3p明顯下調PTEN的表達，而在Hep3B細胞系中抑制miR-19a-3p表達明顯上調PTEN的表達。在PLC/PRF/5和Hep3B細胞系中通過恢復或抑制PTEN的表達可以分別模仿miR-19a-3p低表達或高表達的作用；在PLC/PRF/5細胞系中，過表達miR-19a-3p可上調PI3K/AKT通路中的p-AKT(Ser-473)的表達，在Hep3B細胞系中，抑制miR-19a-3p明顯下調PI3K/AKT通路中的p-AKT(Ser473)的表達； PLC/PRF/5細胞系在轉染miR-19a-3p後，對索拉菲尼的敏感性下降，而在轉染miR-19a-3p抑制劑後，Hep3B細胞系對索拉菲尼的敏感性明顯增加。 結論：1. miR-19a-3p在肝細胞癌組織和肝癌細胞系中高表達；2. miR-19a-3p促進肝癌細胞系的增殖、遷移和侵襲，而對其凋亡無明顯影響；3. PTEN為miR-19a-3p的直接靶點；4. miR-19a-3p通過激活PI3K/AKT通路促進肝細胞癌的增殖和轉移；5. miR-19a-3p可能通過作用於PTEN，調節肝癌細胞系對索拉菲尼的敏感性。
