《miR-140-5p抑制肝細胞癌侵襲轉移作用的研究》是依託中南大學，由楊連粵擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-140-5p抑制肝細胞癌侵襲轉移作用的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊連粵
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝癌的術後復發轉移是制約其長期生存水平提高的關鍵因素。我們前期研究顯示miR-140-5p在肝癌組織中呈顯著低表達，過表達miR-140-5p能有效地抑制HCCLM3細胞系的侵襲轉移能力。故我們推測miR-140-5p很可能具有較強的抑制肝癌侵襲轉移的作用。為此，我們擬採用慢病毒介導的過表達技術、劃痕實驗、Transwell及裸鼠肝癌原位成瘤模型等進一步驗證miR-140-5p在肝癌侵襲轉移中的作用；繼而採用生物信息學、蛋白晶片、螢光素酶報告基因篩選其靶基因並進行系統的體外、體內研究，以期闡明其作用的分子機制；最後構建糖基化修飾的聚乙烯亞胺（PEI）納米顆粒介導的miR-140-5p靶向治療系統，探討其體內系統干預對肝癌侵襲轉移能力的抑制作用。本研究預期將闡明miR-140-5p在肝癌復發轉移中的作用及其機制，並為研製靶向miR-140-5p的肝癌復發轉移治療新藥物奠定堅實的基礎。
結題摘要
肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一，特別是在中國。死亡率高居所有男性惡性腫瘤的第二位，女性惡性腫瘤的第六位。目前肝癌的總體療效仍難以令人滿意，其5年生存率長期徘徊於30％-40％，甚至更低。究其原因，肝癌術後發生的復發轉移是影響肝癌長期生存的根本障礙所在。最新的研究顯示 microRNA(miRNA)在這一過程中起著關鍵性的作用。因此，深入研究探索肝癌復發轉移的分子機制，篩選與研發相關的關鍵干預靶點對於肝癌術後復發轉移的防治具有十分重要的理論意義與實際價值。 本研究以孤立性大肝癌(SLHCC)為切入點，比較不同復發轉移潛能的孤立性大肝癌、小肝癌(SHCC)和結節性肝癌(NHCC)的miRNAs表達譜及其表達差異。我們在初步研究中發現miR-140-5p可能在肝癌的發生髮展過程中發揮著重要作用。因此，本研究中我們以miR-140-5p作為研究目標，深入研究其在肝癌中的表達水平、生物學作用及其作用機制。 本研究通過採用實時定量PCR檢測了120例肝癌組織(HCC)及相應的癌旁非瘤肝組織(ANLT)中miR-140-5p的表達水平，發現在肝癌組織中miR-140-5p呈顯著低表達(p＜0.05)，而且其低表達與肝癌的臨床病理特和肝癌的不良預後具有顯著相關性(p＜0.05)。檢測六種肝癌細胞系中miR-140-5p的表達水平，同樣發現其表達水平均明顯低於正常肝細胞系L02(P＜0.05)。通過劃痕癒合、Transwell侵襲小室、MTT生長曲線、克隆形成和流式細胞儀檢測細胞周期等一系列功能學實驗證實miR-140-5p可在體外抑制肝癌細胞的侵襲轉移和增殖能力。繼之採用裸鼠原位成瘤模型在體內證實miR-140-5p可在體內同樣發揮抑制肝癌細胞侵襲轉移和增殖的作用。採用腫瘤多信號通路篩選、生物信息學預測、雙螢光素酶報告基因系統、Western-blot、免疫組化(IHC)和一系列體外功能學實驗方法證實TGFBR1和FGF9是miR-140—5p發揮生物學作用的直接靶基因。而且，進一步證實miR-140-5p與TGF B信號通路之間存在負反饋調節關係，且TGFBR1處於FGF9的上游。 基於上述，我們首次發現：miR-140—5p是通過靶向調節TGFBR1和FGF9抑制肝細胞癌增殖和侵襲轉移。
