《HULC/miR-613對肝癌調控作用的實驗研究》是依託上海交通大學，由劉湘帆擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：HULC/miR-613對肝癌調控作用的實驗研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉湘帆
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
非編碼RNA(LncRNAs和miRNA)直接或間接調控癌基因或抑癌基因表達，是近年腫瘤研究熱點。本課題組在研究肝癌細胞中高表達的長非編碼RNA-HULC時，首次發現LncRNA(HULC)可調控miR-613的表達和活性，形成LncRNA-miRNA的肝癌分子調控的機制。HULC表達量與miR-613的表達和活性密切相關，具有明顯的負量效關係。然而到目前，miR-613的生物功能和作用靶基因都不明確。我們初步研究已發現miR-613能夠縮短肝癌細胞的生長周期，促進細胞增殖，並通過高通量表達晶片檢測和生物信息學關聯分析，推測它可能是通過ERRB或Src/PTK途徑激活細胞內信號轉導。我們將在原有研究基礎上深入解析HULC/miR-613作用於肝癌的分子網路調控機制，確定miR-613作用的靶基因及其相關信號轉導，為臨床篩選和評估更有效的診斷標誌物和藥物靶點提供重要的實驗依據。
結題摘要
長鏈非編碼RNA (long non-coding RNAs, LncRNAs) 和微小RNA(microRNA, miR)是不具有編碼蛋白能力的RNA分子，在腫瘤形成過程中，以及腫瘤細胞的增殖、運動、侵襲和轉移等多方面起到調控作用，成為近年腫瘤分子機制和表觀遺傳研究的熱點，並且由於此類非編碼RNA在血清中可以穩定存在，因此也成為血清腫瘤標誌物篩查的一個全新領域。肝癌高表達轉錄本（highly up-regulated in liver cancer, HULC）在肝癌細胞內普遍存在高表達現象。我們通過在肝癌細胞株中過量表達HULC，實時螢光定量PCR和螢光素酶報告基因系統檢測microRNA613的表達量和活性，確認了HULC的表達可以調控miR613的表達和活性，且與微小RNA613（microRNA613，miR613）的表達和活性具有明顯的負量效關係。通過高通量表達晶片篩查miR613作用的靶基因，並套用實時螢光定量PCR和蛋白印跡法分別檢測靶基因和靶蛋白的表達情況，確認了miR613的下游作用基因為Src基因。HULC和miR613協同作用於肝癌細胞後，用流式細胞術和軟瓊脂克隆形成試驗觀察肝癌細胞周期和克隆形成能力，發現高表達HULC和抑制miR613表達可以促進肝癌細胞周期改變和克隆形成，其作用的機制是通過激活Src途徑的細胞內信號途徑，改變細胞周期素D1（cyclinD1）和細胞周期抑制蛋白27（P27）實現的。因此本研究證實了肝癌高表達轉錄本可以通過調控miR613，激活Src基因細胞信號轉導途徑，從而促進肝癌細胞的增殖，目前國內外尚未有相關報導，這可以為HULC和miR613作為肝癌血清學檢測指標的臨床套用提供基礎研究和實驗依據。
