《ZEB1-miR-300-FAK通路在肝癌上皮-間質轉化中的作用及其機制研究》是依託中山大學，由汪謙擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：ZEB1-miR-300-FAK通路在肝癌上皮-間質轉化中的作用及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：汪謙
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
上皮間質轉化（EMT）是肝癌轉移的重要始動環節。研究顯示miRNA對EMT具有調控作用。我們前期發現miR-300低表達與肝癌EMT發生密切相關，但miR-300對肝癌EMT的作用及其自身低表達的分子機制不明？我們進一步發現：ZEB1轉錄因子可能通過作用於miR-300啟動子下調其表達；miR-300可能再通過預測靶基因FAK抑制肝癌EMT。故我們推測：ZEB1通過抑制miR-300進而失去對FAK的作用促進肝癌EMT。為論證該假說，本項目擬通過體內外實驗明確miR-300對肝癌EMT的作用；證實ZEB1 下調miR-300具體作用；闡明ZEB1-miR-300-FAK通路在肝癌EMT中的作用及機制；分析大量臨床肝癌組織標本中ZEB1、miR-300、FAK與EMT的相關性；以及它們對肝癌臨床病理和預後的意義。這將為確立miR-300作為抗肝癌EMT的早期診斷和靶點治療提供可靠的科學依據。
結題摘要
研究表明研究miR-300與腫瘤發生髮展密切相關，但是其在腫瘤中的確切作用機制尚未明確。雖然目前miR-300在多種不同的腫瘤中均有研究報導，但是miR-300在肝癌中的具體作用機制尚未闡明。 本項目為了探究miR-300在肝癌中的具體作用機制，我們首先通過檢測肝癌組織和細胞中的基礎表達，結果發現miR-300在肝癌組織和肝癌細胞中普遍下調。結合臨床資料分析發現，其表達下調肝癌預後不佳存在相關性。細胞功能實驗進一步發現miR-300下調與肝癌的侵襲轉移密切相關。隨後通過實驗發現miR-300在抑制EMT和肝癌轉移中發揮重要的作用。並在機制上證明miR-300通過靶向調控粘著斑激酶（Focal adhesion kinase，FAK）抑制PI3K/AKT信號通路產生抑制EMT介導的肝癌侵襲和轉移。使用Real Time PCR或者原位雜交的方法對肝癌臨床組織樣本和肝癌細胞中miR-300表達水平進行檢測。Transwell遷移和侵襲實驗用來評估miR-300過表達或敲低後肝癌細胞的體外侵襲能力。Real Time PCR、Western Blotting、免疫螢光和免疫組織化學等方法用來驗證miR-300和FAK/PI3K/AKT在EMT進展中的作用。雙螢光素酶報告實驗用來確定miR-300的靶基因。雙螢光素酶報告試驗和拯救實驗證實了miR-300通過靶向FAK和下游的PI3K/AKT信號通路來抑制EMT和肝癌侵襲轉移。本項目的研究結果表明miR-300有可能是肝癌治療的新靶點。
