《P57調控細胞自噬在肝癌發生髮展中的作用及其機制研究》是依託西安交通大學，由南克俊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：P57調控細胞自噬在肝癌發生髮展中的作用及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：南克俊
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
自噬對腫瘤發生髮展具有重要意義，其調控機製備受關注。新近報導：CDK抑制劑誘導的細胞周期阻滯及cofilin的磷酸化在自噬中發揮重要作用。結合我們前期研究：CDK抑制劑P57誘導細胞周期阻滯抑制肝癌細胞增殖；調控LIMK1/cofflin途徑影響肝癌細胞侵襲。因此我們推測P57可能通過LIMK1/Cofilin通路調控肝癌細胞自噬，發揮抑癌作用。本課題擬採用慢病毒轉染技術構建P57穩定上/下調肝癌細胞系，透射電鏡觀察肝癌細胞自噬改變；結合DEN誘導小鼠肝癌模型，分析癌變過程中P57與肝癌自噬的關係；利用Western Blot、Q-PCR及動物模型進一步探討P57與LIMK1/Cofilin通路、自噬特異性基因Beclin-1、LC3及自噬相關通路之間關係，闡明P57調控細胞自噬在肝癌發生髮展中的作用及機制，為探尋HCC治療的新靶點提供實驗依據和理論基礎，具有重要的科學意義和套用價值。
結題摘要
既往研究表明，CDK抑制劑誘導的細胞周期阻滯及cofilin的磷酸化在自噬中發揮重要作用；EGFR受體拮抗劑西妥昔單抗可以誘導細胞產生自噬，而抑制自噬可以促進西妥昔單抗誘導細胞凋亡的作用。我們前期研究發現：CDK抑制劑P57誘導細胞周期阻滯抑制肝癌細胞增殖。為明確P57調控細胞自噬在肝癌發生髮展中的作用及機制及其對HCC細胞對EGFR抑制劑的敏感性的影響，本課題通過構建DEN誘導小鼠肝癌模型，分析癌變過程中P57與肝癌自噬的關係；採用慢病毒轉染技術構建P57穩定下調的肝癌細胞系，利用Western Blot、免疫沉澱、免疫螢光染色探討P57與LIMK1/Cofilin通路之間的關係；利用脂質體轉染技術構建p57上調與p57陰性對照組的HCC細胞系，通過MTT法和死活細胞染色法、流式細胞術研究不同細胞系對Er和C-225的敏感性，用Western blot法檢測Er和C-225對不同細胞系中細胞自噬相關基因LC3B-Ⅱ、Beclin-1表達的影響，最後，加入自噬抑制劑氯喹(CQ)抑制細胞自噬後，再次檢測Er/C-225作用前後細胞增殖抑制率及自噬的改變。我們研究發現：1.DEN誘導肝癌發生過程中，小鼠肝組織內P57表達逐漸降低與自噬相關基因beclin1、LC3表達逐漸升高；2.P57可以調控胞質中LIMK1的活性，從而調節p-cofilin在胞質中的表達水平；3.p57可以通過抑制Er/C-225誘導的HCC胞自噬，增加HCC細胞對Er/C-225的敏感性。本研究為探尋HCC治療的新靶點提供實驗依據和理論基礎，具有重要的科學意義和套用價值。
