《oncomiR驅動肝癌幹細胞特性的功能及機制研究》是依託北京大學，由李生擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：oncomiR驅動肝癌幹細胞特性的功能及機制研究
- 項目負責人：李生
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腫瘤幹細胞是腫瘤發生髮展、耐藥和復發轉移的根源，miRNAs是調控腫瘤幹細胞自我更新和分化的重要因子。因此研究miRNAs對腫瘤幹細胞生物學特性的調控作用具有理論和套用價值。本課題組利用肝癌幹細胞-非幹細胞之間的miRNA表達譜，篩選在肝癌幹細胞惡性生物學行為調控中發揮重要功能的oncomiR。結果發現miR-512，miR-516b等在肝癌幹細胞中高表達，體外及體內實驗表明miR-512等oncomiR促進肝癌幹細胞的自我更新和成瘤能力，提出miR-512等oncomiR驅動肝癌幹細胞的惡性生物學特徵轉化的工作假說。本研究將證實上述oncomiR驅動肝癌幹細胞的惡性生物學特徵轉化的作用；確定肝癌乾性相關oncomiR在肝癌發生髮展中的功能意義及分子機制；明確miR-512等oncomiR及其靶基因與肝癌臨床預後的關係，發現可用於肝癌幹細胞特性診斷的分子標誌物及藥物治療的分子靶標。
結題摘要
腫瘤幹細胞是腫瘤發生髮展、耐藥和復發轉移的根源，miRNAs是調控腫瘤幹細胞自我更新和分化的重要因子。因此研究miRNAs對腫瘤幹細胞生物學特性的調控作用具有理論和套用價值。本課題組創建基於肝癌腫瘤起始細胞的新型表面標誌物--電壓依賴性鈣通道α2δ1（亞型 5）亞基研究體系。其中，Hep11和Hep12細胞對為研究肝癌復發耐藥等乾性特徵提供了特有的細胞模型；而α2δ1抗體為篩選肝癌及其他癌腫腫瘤幹細胞提供了基礎。該課題也在此研究基礎上建立與肝癌幹細胞特性相關 miRNAs及其靶基因的預警調控網路。首先，利用原發和復發肝癌的原代培養細胞係為比較肝癌幹細胞-非幹細胞之間的miRNA表達譜，檢測到miR-512-3p 等oncomiR在相對富集肝癌幹細胞中明顯上調，而且高表達 miR-512-3p等oncomiR能明顯促進肝癌細胞的克隆形成能力及小鼠成瘤能力，證實miR-512-3p等oncomiR驅動肝癌幹細胞的惡性生物學特徵轉化功能。通過RT-qPCR檢測本科室收集的肝癌患者臨床標本中miR-512-3p的表達量，發現miR-512-3p在肝癌組織中高表達；進一步通過分析TCGA肝癌資料庫分析，發現miR-512-3p在肝癌組織中高表達並且與肝癌預後成負相關，進而明確了miR-512-3p與肝癌細胞乾性特徵的相關性。通過分子生物學軟體預測miR-512-3p可能的靶基因--UBE2G2,後續通過雙螢光素報告實驗發現miR-512-3p直接結合在UBE2G2 3‘UTR區域；然後Western blot實驗證實其為miR-512-3p靶基因，接著我們進一步通過UBE2G2銀染質譜實驗，尋找到其相互作用的E3連線酶CUL1；通過免疫共沉澱實驗證實UBE2G2的作用底物A-RAF，從而闡明miR-512-3p通過下游靶基因UBE2G2泛素化調控A-RAF/p-ERK通路，進而影響肝癌的發生髮展。
