《Wnt/β-catenin信號轉導通路的激活誘導細胞死亡的機制研究》是依託蘇州大學，由任芳芳擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Wnt/β-catenin信號轉導通路的激活誘導細胞死亡的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：任芳芳
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Wnt/β-catenin信號轉導通路通過調節β-catenin的活性來調控細胞增殖、分化、遷移、凋亡等生命過程，是生物體正常發育和組織穩定維持的重要調節機制之一。Wnt/β-catenin信號的異常激活能促進幹細胞的增殖與更新，與多種癌症的發生、發展有關，因而被認為是一條促癌的信號轉導通路。然而，我們前期的研究工作卻發現，在小鼠神經膠質瘤中分離得到的膠質瘤幹細胞（GSC）中，激活Wnt/β-catenin信號卻能誘導GSC的死亡，其作用機制有待進一步研究。本項目將以體外培養的膠質瘤幹細胞為研究對象，通過慢病毒載體介導的基因操作、基因表達晶片分析、螢光定量PCR等一系列生化與分子生物學實驗方法，系統探索Wnt/β-catenin信號激活誘導GSC死亡的下游調控因子與可能的信號通路，為全面認識Wnt/β-catenin信號通路在癌症中複雜的作用機制和以此為靶點的抗癌藥物的研發提供新的策略。
結題摘要
膠質瘤是中樞神經系統中最常見並且死亡率最高的惡性腫瘤。具有自我更新能力的膠質瘤幹細胞的存在被認為是膠質瘤對化療和放療產生抗性和復發的根源。因而有針對性的消除膠質瘤幹細胞成為治療膠質瘤的有效途徑。本研究發現一種GSK3抑制劑CHIR可以抑制膠質瘤幹細胞的生長， EdU細胞增殖實驗和AnnexinV-PI染色結合流式分析證明CHIR可以抑制膠質瘤幹細胞的增殖和誘導膠質瘤幹細胞的凋亡。過表達constitutively active β-catenin的膠質瘤幹細胞對CHIR更加敏感，而過表達dominant negative TCF的膠質瘤幹細胞對CHIR不敏感，證明CHIR是通過激活Wnt/β-catenin信號通路來抑制膠質瘤幹細胞的生長。進一步通過RNA-seq分析發現Wnt/β-catenin信號通路的激活可以激活Hippo-Yap信號通路。Western blot分析發現 Wnt/β-catenin信號通路可以磷酸化Hippo-Yap信號通路的核心激酶Lats，磷酸化的Lats可以進一步磷酸化下游的Yap並導致Yap蛋白水平的下降。沉默了Yap的膠質瘤幹細胞生長明顯變慢，並且增加了對化療藥物carboplatin和5FU的敏感性。同時，沉默Lats1或者過表達激活形式的YapS127A可以使得膠質瘤幹細胞對CHIR的敏感度降低，說明抑制Hippo-Yap信號通路可以減慢膠質瘤幹細胞的生長並且減弱CHIR對膠質瘤幹細胞生長的抑制作用。本研究的發現將為治療膠質瘤提供新的可能的藥物開發靶點。
