羊水檢查

羊水檢查多在妊娠16～20周期間進行，通過羊膜穿刺術，採取羊水進行檢查。檢查項目包括細胞培養、性染色體鑑定、染色體核型分析、羊水甲胎蛋白測定、羊水生化檢查等，以確定胎兒成熟程度和健康狀況，診斷胎兒是否正常或患有某些遺傳病。

孕婦年齡的增加，生育染色體異常患兒的相對危險性亦增加。據統計，四十歲左右的孕婦，生育染色體異常患兒的可能性為4.5%。生育過染色體異常患兒的孕婦不論孕婦年齡大小，只要生過染色體異常的患兒，其下一胎出生同樣患兒的機率較高。以先天性愚型為例，再出生同樣患兒的可能性約為2%。

基本介紹

• 中文名：羊水檢查
• 外文名：Amniotic fluid examination
• 臨床意義：獲得胎兒健康和發育情況
• 相關疾病：先天性疾病，染色體疾病
• 正常值：早期450-1200mL，足月500-1400mL

來源

生理和病理

胚胎髮育期間羊膜腔中的液體稱羊水（amniotic fluid）。妊娠早期羊水主在是由母全血漿通過胎膜進入羊膜腔的漏出液，這種漏出液也通過臍帶和胎盤表面的羊膜及華爾通膠產生。其成份與母體血漿相似，只是蛋白質含量與鈉離子濃度稍低。母體胎兒和羊水三者間通過不斷進行液體交換，保持著羊水量動態平衡。隨著妊娠的發展，胎兒在羊水交換中的作用越來越大。除上述途徑外，胎兒消化道的吞咽，泌尿系的排尿，呼吸道的羊水出入及皮膚的吸收等等，不僅使羊水量穩中有升，而且使羊水的成分發生了很多的改變。

量的變化

羊水量在妊娠16周時約250毫升，34周達到高峰。妊娠晚期約1000毫升（800-1200毫升）妊娠最後2-4周天始逐漸減少，過期妊娠可減至550毫升。妊娠任何時期內羊水量>2000毫升者稱羊水過多，足月時羊水量<300毫升者稱羊水過少。

羊水檢查

曾生過開放性神經管異常女子的孕婦：已生過無腦兒或脊柱裂患兒的孕婦，下一胎出生同樣患兒的可能性為5%。已生育過一個常染色體隱性代謝病患兒的孕婦：這類婦女下一胎患同樣疾病的可能性達25%。有致病因素接觸史的孕婦：接觸某些影響染色體畸變的物理因素、化學製劑、藥物以及有病毒感染史的孕婦。孕婦進行羊水穿刺檢查，需接受醫生的指導，經認真診斷決定後方可安排進行。

羊水穿刺

羊水穿刺檢查是產前診斷的一種方法。一般適合中期妊娠的產前診斷。羊水存在於羊膜腔內；受精卵於受精第七天形成羊膜腔，開始產生羊水，妊娠12周時羊水量為50毫升，20周時為400毫升，36～38周時為1000—1500毫升，接近預產期羊水量稍有下降。

檢查疾病

先天性畸形

測定羊水中的甲胎蛋白，可知道胎兒是否畸形。甲胎蛋白是胎兒期一種特有的蛋白質，有些先天性畸形，可使羊水中甲胎蛋白含量大大增高。

先天性代謝缺陷

先天性代謝缺陷是指遺傳性酶缺陷所導致的疾病。已發現各種先天性代謝缺陷有100多種，其中80多種可以通過產前檢查羊水中的酶而做出診斷。

染色體異常疾病

胎兒生活在羊水中，其皮膚的上皮細胞，呼吸道、消化道和泌尿道的細胞會脫落在羊水中。這些細胞經培養等特殊處理，可進行染色體核型分析，能準確了解胎兒細胞染色體的數目和結構是否正常，診斷出染色體異常疾病。

伴性遺傳病

伴性遺傳病與性別有關，通過羊水檢查，可確定胎兒性別，並可間接診斷伴性遺傳病，從而防止此類遺傳病患兒的出生。

檢查原因

羊水檢查原因

1.有X連鎖遺傳病家庭史的孕婦。

2.近親婚配與生育過先天性畸形患兒的孕婦。

3.需要知道胎兒性別的孕婦(羊水穿刺具有1%-3%流產，畸形，早產風險)。

4.遺傳疾病檢查。

5.其它。

方法

一般檢查

[正常參考值]

早期妊娠羊水量為450-1200mL，足月妊娠羊水量為500-1400mL。羊水顏色為無色透明或淡黃色。

[臨床意義]

(1)羊水過多，常見於先天性胎兒發育異常。、母親糖尿病等；羊水過少，見於先天性畸形、腎發育不全、肺發育不全等。

(2)羊水粘稠黃色見於過期妊娠，胎盤功能不全。

(3)羊水深綠色見於胎兒窘迫症。

細胞角度

細胞學檢查

[正常參考值]

有鱗形細胞，細胞表面上有脂類物質，經染色可染成桔黃色。妊娠39周左右，桔黃細胞含量增加至10%-15%。

[臨床意義]

羊水中桔黃細胞含量<10%表示胎兒未成熟。

羊水指數

羊水指數（Amniotic Fluid Index 縮寫：AFI）： 以臍水平線和腹白線為標誌將子宮直角分成四個象限，測量各象限最大羊水池的垂直徑線，四者之和即為羊水指數。測量AFI時注意：如羊水池居標誌線兩側，只測量一側的徑線。

相關技術

羊膜穿刺術

穿刺時間

診斷出生缺陷或確定胎兒性別，應選在妊娠16—20周進行。為測定胎兒成熟度及疑為母兒血型不合，應在妊娠末期進行。

穿刺術

術前準備

穿刺前須經B型超聲檢查，確定胎盤位置。選擇穿刺點應壁開胎盤。穿刺點的選擇，一般可選在宮底下2橫指、腹部最隆起部位的兩側，選擇囊性感明顯且有胎兒肢體浮動的一側；也可選在恥骨聯合上方，推開胎先露在胎兒頸後較空虛部位穿刺。因有併發症危險，術前需要得到孕婦及家屬的完全理解和同意。

穿刺步驟

排空膀胱後取仰臥位。腹部消毒應以穿刺點為中心向外圍擴大，半徑不小於10㎝。鋪無菌孔巾。穿刺點局部以0.5%利多卡因浸潤麻醉。持7號無菌腰穿針垂直刺入。經腹壁及子宮壁兩次阻力，進入羊膜腔時有組織抵抗突然消失的落空感。拔出針芯即有羊水流出，用注射器抽取羊水約20ml，按需要立即送檢。隨後拔除穿刺針，用棉球和紗布蓋住針孔，加壓5分鐘後膠布固定。

注意事項

（1）抽不出羊水：可能為羊水有形成分阻塞針孔，使用有針芯的穿刺可避免。因穿刺方向不對或因進針深度不夠，可調整穿刺方向與深度，或在宮壁兩側輕輕推壓即可抽出羊水。若羊水過少，不宜勉強穿刺以免損傷胎兒。

（2）抽出血液：出血來自腹壁、子宮壁、胎盤或刺傷胎兒血管，應立即拔出穿刺針並壓迫穿刺點，腹帶包紮。同時聽取胎心率，確定胎心率正常則可等待一周后再穿刺。羊水混有多量血液，胎心率改變明顯，應儘早終止妊娠。若能用B型超聲監護能減少刺出血的發生。

併發症

（1）母體損傷：穿刺針刺傷血管引起腹壁血腫子宮漿膜下血腫。偶見羊水由穿刺孔進入母體血循環引起羊水栓塞。穿刺前未排空膀胱可刺傷膀胱，患腸粘連者有刺傷腸管的報導。

（2）損傷胎兒、胎盤及臍帶：穿刺針損傷胎兒進可發生出血，刺傷胎盤與臍帶也可發生出血或形成血腫。故抽出血性羊水時應鑑別出血來源。若疑來自胎兒，應不斷聽取胎心。

（3）羊水滲漏：術後羊水自針孔滲漏，造成羊水過少，影響胎兒發育，甚至引起流產或早產。

（4）流產或早產：流產或早產的發生率為0.1%—0.2 %，常發生於術後一周內，偶於穿刺後出現胎膜早破導致早產。

（5）宮內感染：術後可有母體發熱。宮內感染可致胎兒發育異常，甚或胎死宮內。故羊膜腔穿刺應嚴格無菌操作。

羊水標本

（1）羊水標本的判斷：正常羊水於妊娠早期多呈無色澄清液體。於妊娠晚期羊水因混有胎脂、脫落上皮等有形成分而呈乳白色。若混有胎糞，則呈黃綠色或深綠色，為胎兒窘迫徵象；若呈金黃色多為羊水內膽紅素過高，來自母兒血型不合；若羊水呈黃色粘稠能拉絲，提示胎盤功能減退或妊娠過期；若羊水混濁，呈膿性，有臭味表示羊膜腔內有明顯感染。此外，還應通過生物化學、脫落細胞檢查、細胞培養等方法，對胎兒病理狀況作出進一步診斷。

（2）羊水標本的處理：抽出的羊水應立即送檢。若不能立即送檢，應放在4℃冰櫃內保存，但不得超過24小時。羊水經1000—2000r/min離心10分鐘後，取其上清液作多項生化檢查。屬中期妊娠的羊水細胞，作染色體核型分析或先天性代謝缺陷病檢查；屬晚期妊娠的羊水沉渣，多作含脂肪細胞及其他有形成分的檢查。

羊水成分

羊水中98-99%是水，1-2%是溶質。溶質一半是有機物，一半是無機鹽。此外還有極少量的細胞。

（一）有機成分 1．葡萄糖：頭號水中葡萄糖含量較母體血清中低，約為2.02-2.76mmol/L。妊娠37周后由於胎盤的透過能力下降，葡萄糖含量亦有輕度降低。

2．脂肪：其中50%為脂肪酸，磷脂類約為30-45mg/L，妊娠後半期膽固醇為 0.52-2.48mmol/L，甘油三酯在妊娠 30惆時為 23μmol/L，足月時平均為68μmol/L.。

3．蛋白質及蛋白質衍生物：羊水的有機物中，50%是蛋白質及其衍生物。隨著妊娠進展蛋白質逐漸減少，妊娠22周時為10g/L,30周時下降為5g/L。

4．膽紅素：正常妊娠時，羊水中有少量的膽紅素，妊娠28周以前的主要是不結合但紅素，以後隨著胎兒肝逐漸發育成熟而使結合膽紅素增加，未結合膽紅素減少。

5．代謝產物：羊水中的代謝產物主要有肌酐、尿酸、尿素、它們均隨妊娠的進展而增加，反映了胎兒腎的逐漸成熟。

6．甲胎蛋白：由胎兒肝細胞及卵黃囊合楊，其濃度從妊娠開始後逐漸上升，胎齡16-20周達高峰，可達40mg/L,20-22周以後逐步下降，32周后降至 25mg/L左右，並一直維持到足月。

7．激素：羊水中的激素可來自胎盤及胎兒，包括皮質醇、孕酮、睪酮、催乳激素、絨毛膜促性腺激素、雌三醇及前列腺素等。

8．酶：羊水含酶種類數十種，主要來源於羊水中所含細胞的破壞與解體，胎兒唾液腺分泌，沁尿道及腸道排泄，胎盤滲放，胎兒血清經羊膜滲入以及病理情況下由腦脊液漏出，腹腔臟器滲出或漏出。其中有診斷價值的常用羊水酶有γ-谷氨醯轉移酶、肌酸激酶、膽鹼碡酶、鹼性磷酸酶、乳酸脫氫酶等。頭號水的酶學指標對於產前診斷及有關遺傳病檢查有一定意義。

（二）無機成分 1．電解質：由於胎兒低滲尿進入羊水，羊水逐漸成為低滲，鈉與氯輕度下降，鉀略有上升、鈣、鎂、磷、鋅、硫、錳均無變化。

2．氣體：妊娠晚期，胎兒腎排泄的固定的酸增中，使羊水中PCO2上升，碳酸氫鹽減少，酸性略增加，先兆子癇，過期妊娠及盈兒宮內生穆斯林遲緩者，羊水中PCO2均較正常時為高，如有胎兒死亡，因胎兒窒息繼發的糖酵解作用可使羊水PH降低。

（三）羊水中的細胞 羊水中有兩類細胞：一類主要來自胎兒的表皮脫落，細胞核小而緻密，胞質與胞質比為1：8胖有高百分雙的無核細胞；一類來自於羊膜，胞質染色深，核大，胞核與胞質比為1：3。妊娠期12前羊水中細胞很少，妊娠32周后來自羊膜的細胞減少，足月時來自胎兒的無核多角形細胞增多。用1.36mmol/L硫酸尼羅藍染色，可將一部分來自皮脂腺的細胞染色成橘黃色，這類細胞的增多，反映了胎兒的成熟。

標本採集

前期要求

羊水檢查適應證

羊水檢查屬有創性檢查，必須具備下列指征之一方可進行。

1．對高危妊娠有引產指征時，可了解胎兒成熟度，結合胎盤功能測定，決定引產時間，以降低圍生期死亡率。

2．曾有過多次原因不明的流產，早產或死胎史，懷疑胎兒有遺傳性疾病者；曾分婚過染色體異常嬰兒者；夫婦一方或雙方有染色體異常或親代有代謝缺陷病者。

3．35-40歲以上高齡孕婦，聊外胎兒染色體異常。

4．必要的胎兒性別診斷。

5．妊娠早期曾患過嚴重病毒感染，或接觸過大劑量電離輻射。

6．母胎血型不合，判斷胎兒的預後。

7．疑有胎膜早破不能確診時，可作陰道流液的PH及塗片檢查有無羊水有形成分結晶和脂肪細胞以確定是否為羊水。

標本收集

羊膜穿刺多由婦產科醫師進行。根據不同的檢查目的，選擇不同的穿刺時間。為診斷遺傳性疾病和胎兒性別，一般需於妊娠16-20周經腹羊膜腔穿刺抽取羊水20-30毫升，為發解胎兒成熟度則在妊娠晚期穿刺。一般抽取羊水取後必須立即送檢。

一般性狀

羊水的一般性狀

正常羊水於妊娠前半期為無色透明或呈淡黃色，後半期因羊水混有胎脂，脫落在上皮等有形成份，故呈微乳白色。如呈黃綠色，表示羊水骨混有胎糞，為胎兒窘迫的現象；如量棕紅色或褐色多為胎兒已經死亡；金黃色的羊水可能為母兒血型不合所引起的羊水中膽紅素過高；粘稠拉絲的黃色羊水表示妊娠過期或胎盤功能減退；混濁膿必開帶有臭味者，表示宮腔骨已有明顯感染。

胎兒檢查

胎兒成熟度檢查

胎兒成熟度的監測是決定高危妊娠選擇合理的分婚時間和處理方針的重要依據，主要是通過羊水中某物質的消長來觀察胎兒的器官功能是否發育完善。

肺檢查

胎兒肺成熟的檢查對判定新生兒的特發性呼吸窘迫綜合徵（idiopathic respiratory distress syndrone，IRDS），亦即新生兒肺透明膜病極有意義。此種情況主要見於妊娠37周前分婚的早產兒。病死率為50%-70%，此病也可見於剖宮產兒及產母有糖尿病可妊高征的初生兒。RDS占所有新生兒死亡病例為19.5%。患RDS的新生兒被症實為因肺泡表面活性物質，主在是卵磷脂缺乏。因此使肺泡表面張力增加和穩定性喪失而導致呼氣末肺泡萎陷，進行性倆肺膨脹不全。機體缺氧，肺泡上皮細胞破壞，通透明性增加，含纖維蛋白原，的液體不滲入肺泡壁形成透明膜，阻礙換氣而死亡。

常用的檢測方法有羊水泡沫振盪試驗、羊水吸光度測定，薄層包譜法卵磷脂和鞘磷脂比值測定，酶法卵磷脂定量以及營業螢光偏振測定。

1．羊水泡沫試驗：羊水中的一些物質可減低水的表面張力，經振盪後，在所液界面可形成穩定的泡沫。在抗泡沫劑乙醇的存在下，蛋白質、膽鹽、游離脂肪酸和不飽和磷脂等形成的泡沫在幾鈔鐘內即使迅速破壞消除。而羊水中的肺泡表面活性物質和磷脂是即親水又親脂的兩性界面物質，它甩形成的泡沫在室瘟下可保持數小時，故經振盪後可在報導液界成出現環繞試管邊緣的穩定泡沫層。該試驗是最常用的床邊試驗，一般取試管2支。第一管羊水與95%乙醇之比為1：1，第二管比例為1：2。經強力振盪15-20秒後，靜置15分鐘後觀察，如第二管表面遙存在完整泡沫環，則L/S比值大於等於2，提示胎兒成熟，如僅第一管表面存在完整泡沫環，則L/S比值可能<2；如兩管均不見泡沫環，則提示胎我不成熟。進一步精確的羊水泡沫試驗還可以將羊水與95%乙醇進行一系列的稀釋試驗。

2．羊水吸光度測定：羊水吸光度測定是以羊水中磷脂類物質的含量與其濁度之間的關係為基礎的。當波長為650nm時，羊水中磷脂類物質越多，A650越大，胎兒的成熟度越好。測定時以蒸餾水調零，光徑1cm，波長650nm，讀取A值，有文獻報導認為A650大於等於0.075為陽性，表示胎兒成熟。如A650小於等於0.050為陰性，表示胎兒不成熟。

3．薄層層析色譜測定卵磷脂/鞘磷脂比值在妊娠早期羊水中卵磷脂濃度很低，35書刊號後突然升高，而鞘磷脂在妊娠32-40周較穩定，因此L和S在組成上的變化可以蝗顯反映也胎兒肺的成熟度，TLC法有較高的準確性，原量是用有機溶劑氯仿抽提羊水中的磷脂，將標本與L/S標準品置由矽膠G或H鋪成的TLC板上展開，可選擇不同的染色劑職鉬藍、羅丹明B硝酸氧鉍、磷鉬酸、甩化亞錫或飽和碘蒸氣等，著色後依層快慢標準品吸顯示磷肥醯甘油、磷肥醯絲氨酸、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、卵磷脂、和鞘磷脂的位置，將樣品與標準品對照，測量樣品L和S色譜斑面積或用光密度計掃描求得L/S比值。以L/S>2.0作為判定胎兒肺成熟的閾值。以此值預測IRDS的靈敏度為84%，非IRDS的了病率卻高於正常孕婦的新生兒，這點不應忽視。關於IRDS研究及其方法學進展很快，除上述方法外，還可用酶法直接測定卵磷肥和磷肥醯甘油，如卵磷脂<40mg/L則說明胎兒不成熟，羊水中如檢出磷脂醯甘油，即使L/S<2.0新生兒也不會出現IRDS，螢光偏振微粘度測量是根據較高的表面活性物質可產生較低的偏振值，FP與創刊齡呈負相關的原理，以嚳偏振為單位，將淨偏振300mpol定為醫學決定水平，來判定IRDS。其靈敏度為87%，特異性為92%。

腎檢查

1．肌酐測定：羊水中的肌酐來撲克胎兒尿，為胎兒代謝產物，其排泄量反映腎小球的成熟度。雖然肌酐在反映胎兒成熟度方面是一個可靠的化學指標，但其濃度受幾種因素干擾，因此在解稀和判斷抬兒成熟度時應注意：①羊水中肌酐濃度受羊水量和胎兒肌肉發育程度和影響；②孕婦血漿肌酐濃度會影響羊水肌酐濃度。羊水肌酐範圍較寬，為159.1-353.6μmol/L，一般高於血漿值。肌酐濃度大於等於176.8μmol/L提示胎兒成熟，132.6-175.9μmol/L為可疑，小於等於131.7μmol/L為不成熟。

2．葡萄糖測定：羊水葡萄糖主要來自母體，部分來自胎兒尿。妊娠23周前隨羊膜面積擴大，羊水理增加，AFG逐漸增加，至24周達高峰2.29mmol/L左右，以後隨胎兒腎成熟，腎小管對葡萄糖重吸收增強，胎尿排糖量減少，加上胎兒盤通透明性隨胎齡增加嘏降低，AFG便逐漸減低，臨產時可降到0.40mmol/L以下。AFG<0.56mmol/L，提示胎兒腎發育成熟；AFG>0.80mmol/L為不成熟。

肝檢查

羊水中的膽紅不比物質隨著胎兒肝臟酶系統逐漸完善而減少，因此羊水中膽紅素濃度可作為判斷胎兒肝成熟的一個指標。根據膽紅素中450nm 有吸收峰的特點，取5-10毫升羊水以濾紙去除上皮細胞與胎脂，以蒸餾水調零，光徑1.0cm,波長450nm讀取吸收光度。A450<0.02提示胎兒肝成熟;0.02-0.04為可疑，>0.04為未成熟。此外該項檢測還可協助診斷胎兒溶血及估計溶血的進展情況，為胎兒出生前後的臨床處置之不理提供依據。如果孕婦本人有某種原因的溶血性貧血或嚴重肝功能不良的時，也會致羊水的膽紅素升高，應予以注意。羊水膽紅素定量應<0.43μmol/L。

皮脂腺檢查

羊水中和脂肪細胞為從胎兒皮脂腺及汗腺脫落的細胞，晚期妊娠時，羊水中脂肪細胞出現率隨胎齡增加而增高，可作為胎兒皮膚成熟的指標。將羊水的離心沉澱物滴於載玻片上，加1.36mmol/L硫酸尼羅藍水溶液1滴混勻，1-2min後加蓋片，於炎焰上 50-60攝氏度緩緩加熱2-3min，置顯微鏡下觀察，脂肪細胞無核，染色楊橘黃煞費苦心，其它細胞染色成藍煞費苦心，計數200-500個細胞，計算脂肪細胞出現率。如出現率>20%為成熟，10-20%為可疑，<10%為未成熟，但大於等於50%.為過熟。

唾液腺檢查

羊水中澱粉酶來自胎兒胰腺及唾液腺。胰腺型同工酶自始致終變化不大，唾液腺型同工酶自妊娠28周左右開始增加較快，顯示胎兒唾液腺有公泌功能，妊娠36周后其活性顯著上升，因此測定羊水中澱粉酶含量，可作為判斷胎兒成熟度一個指標，胎齡>38>周，若酶活性> 120蘇氏單位為成熟兒，否則為未成熟兒。

肌酐、葡萄糖、膽紅素和澱粉酶測定方法詳見“臨床生物化學和生物化學檢驗”。

產前診斷

先天性遺傳性疾病的產前診斷

先天性疾病包括遺傳性疾病，即親代的病態基因經生殖細胞配子結合形成合子時傳給子代的疾病，和非遺傳因素，如一些在配子形成，染色體聯會時的基因突變，受精卵以育等過程中由於某些外在因素的影響而引起和疾病。這類疾病表現為患兒智力，器官結構和功能和種種缺陷。產前診斷中可將先天性遺傳性關病分為三大類：

診斷

1．染色體病：由於遺傳或環境因素引起染色體的數目及結構上的異常造成的疾病。在臨床上可發現新生兒的有多種畸形並常伴有智力障礙。這類病紅占出生總數的0.5%，產前診斷的25-50%。

2．單基因遺傳病：僅有一對基因發生突變或異常引起的疾病。絕大多數表現為酶的缺陷。臨床上稱為先天性代謝病。能用生化方法診斷的約有300種，其中50%為常染色體顯性遺傳，40%為常染色體隱性遺傳，10%為性連鎖遺傳全以X伴性遺傳為多見。一般占出生總數的1.8%，產前診斷的6-10%。

3．多基因遺傳病：兩對以上的多對基因突變。各對基因呈共顯性，每對基因的作用是微小的，但若干對基因作用積累，或形成一個明顯的效應，在臨床上出現一個病狀群，主要表現為一些先天畸形，如唇、齶裂和畸形足、脊柱裂、無腦兒、神經管畸形、幽門狹窄、先天性髖關節脫位、先天性心臟病等，這類病占出生總數的2.6%，產前診斷的40-50%。某些多基因異常遺傳病，如I型糖尿病、高血壓病、冠心病、哮喘、精神分裂症等常是遺傳因素與環境因素共同作用的結果，它只能從群體調查和空族系譜的發病率中了解其分布及復現率。

染色體病核型分析

核型分析主要用於檢查染色體因婁衢虞結構異常而造成的遺傳性疾病。一般是將新鮮的羊水20-30毫升，經離心得到羊水中的細胞，經RPMI1640培養液與25%小牛血清中培養8-10天后，以秋水仙素處理，使細胞均停止在M期，經獲得分裂相細胞，將細胞經低參、固定、製片處理後，進行Giemsa染色或用顯帶染色，然後進行核型分析。

性染色質檢查和性別基因診斷

（一）性染色質檢查

羊水細胞性染色質的檢查有助於診斷性連鎖性遺傳病（sex linked inheritance disease,）如甲、乙型血友病，原發性低丙種球蛋白血症，自毀容貌綜合徵，肌營養不良，G-6PD缺乏症。粘多糖沉積病二型，糖原代謝病二型如果父親為X-連鎖隱性基因攜帶者，攜帶者，父親正常，則男胎一半正常，一半工半為患者；女胎一半正常，一半為基因攜帶者，可根據檢測結果決定是否繼續妊娠。常規的檢查方法是將羊呂10毫升注入離心管，以1000r/min1離心0min棄上清，管底沉澱物加甲醇冰乙酸液8ml固定30min，按前述條件離心棄上清，再加少許新鮮固定液製備成細胞懸液，取1-2滴於載玻片上，空氣中乾燥待染色。

羊水細胞製片選用於：①X染色質檢查（examination of X chromatin 或Barr rest）：一般採用硫瑾或甲苯胺藍染色，經油鏡觀察。鏡下可見到兩類細胞核，一類核大，核膜完整，結構清晰，染色質均勻，稱可數細胞；加一類核小固縮或染色過深，結構分辨不清或核重疊，有破損，為非或細胞。在可數細胞的核膜內緣處，見到呈深藍色的三角形，半圓形或饅頭形的染色質塊，其大小約1.2μm×0.7μm 左右，即X染色質，記錄X性染色質的細胞當選目算出其百分率。X染色質≥6%者判為女胎，≤5%者判為男胎。②Y染色質的檢查採用阿的平螢光染色，在螢光顯微鏡下觀察，可崢細胞核的偏中心部或近核膜處有 0.3μm大小的螢光弧狀圓點，輪廓清晰，較其周圍的核質螢光屏光為強，有時螢光點過大或過小，所發螢光很強，與其餘核質所螢光分開，這種螢光小體就是Y染色質。當螢光點過大或過小，所發螢光很弱與核質螢光無區別時，則不是Y染色質。選擇核均勻，核完整清晰的可數細胞，計算出有Y染色質細胞的百分率，Y染色質細胞≥5%診斷為男胎，<4%婦胎。如羊水細胞中X、Y小體同時大於等於5-6%應考慮是否為性染色體數量異常，此種病例應直一步分析核型。

（二）、性別基因診斷

隨著基因的診斷技術發展，胎兒性別診斷有了更準確、更靈敏的方法，使對於性連鎖疾病診斷的正確性可靠性大為提高。最常用的方法是：

1．Y特異DNA探針對人性別診斷，有關Y染色體DNA的探針有多種，如PHY3.4，PHY2.1等，目前最公認的是Y染色體特異的SRY基因，在男性性別決定中起關鍵作用。將羊水細胞用細胞裂解液解後，點於硝酸纖維膜上與P標記SRY基因探針直接進行斑點雜交，或將羊水細胞DNA經0.7%瓊脂糖凝膠電泳分離後進行Southern印跡雜交，凡出現雜交斑點或代的為男性，不顯示或顯示極弱者為女性。

2.PCR基因擴增法測定性別以常規蛋白酶-SDS-酚法提取羊水細胞DNA0.1-1.0μg或直接羊水細胞裂解得到DNA為模板，進行PCR基因擴增測定胎兒性別，用於產前診斷胎兒性別的Y染色體基因有4種：DYZ1，DYS14，ZFY和SRY。目前認為SRY是睪刃決定因子的最佳候選基因，以兩對SRY基軒HMGRox保守序列的引物進行DNA擴增1.5%瓊脂糖電泳，溴化已錠染色，根據фXHae分子量標準，男性胎兒在分子量為271bp處可見一SRY特異區帶。

其它檢查

羊水是清液的生化及免疫學檢查主要用於遺傳性代謝的病的檢測。已知的遺傳性代謝病有3000多種，有89種可進行產前診斷。這些先天性代謝病產前診斷方法大都比較複雜。臨床實驗室能夠開展一些簡單方法主要用於粘多糖沉各種積病，開放性神經管缺陷和某些酶缺陷的檢查。

（一）粘多糖沉積病的檢查

粘多糖沉積病是由於細胞溶酶體酸性水解酶先天性缺陷所致。根據病因本病可分為八大類型，我國已報告200從余例，主要表現為嚴重的骨骼畸型、腫脾腫大，智力障礙以及其它畸形。粘多糖沉積病產前診斷以測定培養羊水細胞內特異的酶活力最為可靠，但實驗要求高，一般實驗室難開展。兩種較簡單的實用的方法是甲苯胺藍定性及糖醛酸法半定量測定。

1．甲苯胺藍定性：方法同尿液粘多糖檢查。妊娠早期羊水正常者可呈陽性，妊娠中後期為陰性如陽性提示胎兒患粘多糖沉積病。

2．糖醛酸半定量測定：羊水中酸性粘多糖與四硼酸鈉硫酸溶液反應生成糖醛酸，以每毫無肌酐中糖醛酸的量反映酸性糖多糖的多少。隨著妊娠的進展，糖醛酸含量逐漸減少，妊娠16-20周的參考值為3.3-7.0mg/mgCr，如高於此值應考慮有粘多糖沉積肥病。本法除Morguio綜合徵外對其它類型的粘多糖沉積病均有診斷意義。

（二）神經管缺陷的檢查

1．甲胎蛋白測定神經管缺陷在產前診斷中占有很大的比例。而羊水甲胎蛋白的測定診斷神經管缺陷的常規方法。AFP主要在胎兒肝臟及卵黃囊內合成，羊中AFP來自胎兒尿，小部分來自胎兒胃腸道信羊膜，絨毛膜細胞。正常妊娠羊水中AFP在妊娠15周時最高，可達40mg/L，20-22周逐步下降，23周后穩定下降，32周后降至25mg/L並一直維持此水平至足月。開放性神經管缺陷的胎兒，如無腦兒和脊柱裂，胎血內的AFP可從暴露的神經組織和脈絡叢滲入羊水，使AFP高於正常10倍以上。羊水中AFP測定對胎兒神經管缺陷診斷屬非特異性的檢查。胎兒血中AFP含量比羊水高150-200倍，故穿刺傷及胎兒及胎盤，可出現假性升高此點必須注意。AFP測定需將妊娠中期羊水上清稀釋100倍後，按血清AFP免疫學方法測定。

AFP除用羊水檢測外亦可用母體血篩查，診斷開放糖果經管畸形的準確率達90%以上，因此具有特殊診斷價值。此外胎兒其它畸形如先天性腎疾病、食道閉鎖、腦積水、骶尾畸形瘤、染色體異常，糖尿病，先兆子癇等各種原因引起的胎盤功能不足，流產，胎死宮內等，羊水AFP也可升高。

2．羊水總膽鹼酯酶測定：常用於確認升高的羊水AFP水平。羊水含有的膽鹼酸酶依其對乙醯膽鹼的親和力差異，分為真性膽鹼酯酶和假性膽鹼酯酶兩種。胎兒早期機體內即已合成CHE，於妊娠12周時可測得羊不中CHE顯著升高，當胎兒神經稍不成熟時，從胎兒的禽脊液和血液滲出到羊水中的CHE比成熟時為多，故做為羊水TCHE測定，可用於對開入性神經管缺陷的診斷。測定方法為用丙醯硫代膽鹼或乙醯硫代鹼用為底物，5，5-二硫代雙為顯色劑的速率法或終點法。

3．羊水中真性乙醯膽鹼酯酶測定羊水中真性乙醯膽鹼脂酯活性能增加與胎兒開入性神經管畸形高度相關，ACHE定性的聚丙烯醯胺凝臁電泳分析是當前常用的方法，特別是對於神經管畸形可疑症的確診。該方法首先經PH8.1電泳將PCHE和ACHE分開，再根據酶學反應原理，與CHE底物乙醯硫低膽鹼和反映示劑共同溫育，CHE分解底物產生的硫代鹼膽與銅離子反應形成複合物，在酶區事業出現白色沉澱線。正常羊水電泳後可見一條慢速的PCHE區帶，快速的ACHE區帶極微。開入神經管缺陷羊水可見明顯的快泳的ACHE區帶，而同時平等加入ACHE特異抑制劑BW284C51的樣品電泳後，可見此ACHE區帶消失。ACHE定性電泳時一定要做陽性與陰性對照，以保證結合判斷準確無誤，漲膠電泳分析為無腦畸形和開入性脊柱裂的篩診陽性率可達到99.5%，但胎兒患臍疝流產和其它嚴重先天畸形進羊水ACHE也可陽性。因此對於診斷結論，決定是否完成或終止妊娠必須結合其它檢查綜合考慮。

（三）胰腺纖維囊性變的檢查

1．γ-谷氨醯轉移酶測定：正常妊娠羊水GGT活性以妊娠14-15周時最為高，約為母體血漿的10-100倍，然後漸降，至胎齡30-40周時，只有15周時的1/40。於15周左右測定GGT的產前的早期診斷胰腺纖維囊性變的最佳指標，預測準確性達77-84%，GGT下降的原因是富含GGT的小腸微絨毛停止發育或有酶的抑制物釋入羊水所至。此外胎兒的染色的體病，如21三體或18三體綜合徵畸胎GGT也明顯的下降。

2．鹼性磷酯酶測定羊水ALP在妊娠19周左右活性最高，然後漸降，至29周后活性降至產前水平。在妊娠16-24周羊水ALP中3/4為小腸型，1/4為肝、骨、腎型。胎兒胰腺纖維囊性變時由於腸黏膜表面微絨毛異常而致小腸型ALP極度下降，此外可協助診斷此外21三體18三體綜合徵畸胎也可見ALP活性降低。

（四）死胎的檢查

1．肌酯激酶測定羊水CK活性與胎齡無關，在正常孕婦羊水中約為其血清濃度的1/5或更低，主工為CK-BB。羊水中CK升高主要來源於死胎組織的骨骼肌分解，所以CK活性與死亡時間呈正相關，而且是CK-MM升高。此外畸胎瘤、腹裂或無腦畸胎羊水的CK-BB含量亦可升高。

2．乳酸脫氫酶測定死胎羊水LD活性明顯升高，但由於宮內組織損傷，羊水受紅細胞污染等均可引起羊水LD增高，故特異性不強。

酶分析

採用微時測定法測定羊水細胞中某種酶的活性，診斷胎兒是否有此種酶的異常。方法是將羊水細胞放在鋪有聚酯膜的塑膠培養皿中培養8-14天，待細胞生長到1000-10000個時，迅速將長有細胞的培養皿冰凍乾燥，然後在顯微鏡下將其切成含10-20個細胞的小片，在石蠟的保護下，將其與少量底物保溫，當細胞和底物發生反應後，用毛細管吸出已形成的螢光顯色產物，在顯微分光光度計或顯微螢光光度計下進行測定。酶缺陷純合子者不顯色。雜合子者顯色較正常對照減低。

產前診斷

1．DNA分子雜交法，用已知的一段互補DNA作為探針，經放射標記後與羊水細胞的DNA進行印跡雜交，並用放射自顯影法得出結果，來診斷胎兒的遺傳性疾病，如用珠蛋白α基因片段兩個探針檢測α珠蛋白生成障礙性貧血。

2．限制性內切酶多態性位點的連鎖分析DNA限制性內切酶能識別特定的鹼基順序，因而能在只別位點特異地把NDA切割成各種一定大小的片段，通過瓊脂糖凝膠電泳的分離，直接用溴化乙錠顯色或用Southern印跡法把這些NDA片段轉移到硝酸纖維膜上，再與已用核素標記的特異基因探針進行NDA分子雜交，採用放射自顯影技術，顯示出相應的NDA片段，從而可鑑定出是否有基因缺失或異常，例如中國人β珠蛋白生成障礙性貧血的RELP連鎖分析。

3．利用PCR技術擴增NDA探測致病基因利用PCR技術可將一個基因拷貝放大10萬倍，所得大量均一的NDA再用寡核苷酸探針雜交，放射自顯影和酶切位點分析探測致病基因。至今利用PCR可推測的遺傳病約有50多種。

以上這些分子生物學技術已廣泛用於遺傳性疾病的產前診斷如鐮狀細胞性貧血，Bart水腫胎兒、HBH病信其它α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者、β珠蛋白生成障礙性貧血、甲型血友病、α-抗胰蛋白酶缺乏症苯丙酮尿症、杜氏進行性肌營養不良、視網膜母細胞瘤、Wilson病、Huntington舞蹈病等，做為先天性遺傳性疾病的診斷技術必將有廣泛的套用前景。

胎兒血型

胎兒血型的預測

羊水中存在ABH（O）血型物質，故可在妊娠期預測胎兒的血型，以便對母體胎兒血型不合者進行圍生期監護、治療和對新生兒的作好搶救準備。

ABH分泌型血型

本試驗是根據羊中分泌的血型物質可將相應抗血清中抗體中和原理設計的。將羊水與0.2毫升最適稀釋度的抗A抗B抗H血清0.2毫升分別混勻，馮分作用10min後，便血型物質將抗體中和完全，再於各管加入相對應的2%標準A型，B型，O型紅細胞懸液各0.2ml，充分混勻。置室溫30min，低速離心1分鐘觀察有無凝集。結果判斷見表18-1。

表 18-1 羊水血型結果判斷

血型判斷	凝集情況
抗A血清（孔）	抗B血清（孔）	抗H血清（孔）
A型分泌型	-	4+	4+
B型分泌型	4+	-	4+
O型分泌型	4+	4+	-
AB型分泌型	-	-	4+
非分泌型	4+	4+	4+

本試驗最關鍵的部分是要選擇好抗血清的最適稀釋度。即選擇抗血清與2%標準紅細胞懸液恰能產生4+凝集的最高稀釋度，這樣才能在加入羊水後將相應抗體中和掉不再出現4+凝集。通常是將抗血清0.2ml用生理鹽水做1：1-1：256倍比稀釋後，將2%A，B，O型標準紅細胞加入0.2ml混勻，置室溫1小時後觀察結果，以出現4+凝塊的最高稀釋度定為最適稀釋度。實驗中要注意控制溫度，以免由於抗血清中冷凝集素未被完全吸收而造成結果判斷錯誤。

ABH（O）血型

羊水ABH血型物質的測定，無法預測非分泌型胎兒的血型。已知由A基因產生的N-乙醯氨基半乳糖轉移酶能將N-乙醯氨基半乳聯接在H物質末端的半乳糖上，形成A血型物質，B基因產生的D-半乳糖轉移酶將D-半乳糖聯接在H物質末端的半乳糖上，形成B血型物質。當有糖供體、二價錳離子與O型紅細胞共同孵育時，羊水中的轉移酶可在紅細胞膜上合億A或B物質，利用血型測定的方法可檢測埋分泌型胎兒的血型。這時有嚴重ABO同種免疫史的孕婦非分泌型的胎兒血型鑑定提供了可能，也為在位於ABO基因部位的遺傳性疾病的產前診斷提供了可能，而可不必考慮胎兒是否為分泌型。