EGFR/TRPV1信號通路在腫瘤發生髮展中的作用及其機制研究

《EGFR/TRPV1信號通路在腫瘤發生髮展中的作用及其機制研究》是依託深圳大學，由鄭多擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：EGFR/TRPV1信號通路在腫瘤發生髮展中的作用及其機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：鄭多
• 依託單位：深圳大學

項目摘要

EGFR基因突變、過量表達或活性異常增高，與腫瘤發生密切相關。TRPV1是一種陽離子通道，研究顯示具有腫瘤抑制作用，但作用機制不明。我們曾首次報導TRPV1結合併調節EGFR；敲除TRPV1基因或使用拮抗劑，促進小鼠皮膚癌發生。 我們新近又發現EGFR使TRPV1磷酸化。然而，在EGFR高活性的腫瘤中，TRPV1的磷酸化水平、離子通道活性的改變、以及在腫瘤發生髮展中的作用和分子機制不明，需深入研究。 本項目擬採用GST pull-down、免疫螢光染色、點突變、激酶實驗、膜片鉗、鈣離子螢光標記、siRNA、平板集落形成、AnnexinV/PI雙染法、Tunel法、Transwell小室、荷瘤小鼠模型等方法，研究EGFR對TRPV1的磷酸化作用，闡明該作用對TRPV1通道門控及通道功能的影響，探索EGFR與TRPV1通路間的串話機制，以及在腫瘤發生髮展中的作用，為腫瘤預防和治療提供新靶點。

結題摘要

EGFR基因突變、過量表達或活性異常增高，與腫瘤發生密切相關。TRPV1是一種陽離子通道，研究顯示具有腫瘤抑制作用，但作用機制不明。我們曾首次報導TRPV1結合併調節EGFR；敲除TRPV1基因或使用拮抗劑，促進小鼠皮膚癌發生。我們新近又發現EGFR使TRPV1磷酸化。然而，在EGFR高活性的腫瘤中，TRPV1的磷酸化水平、離子通道活性的改變、以及在腫瘤發生髮展中的作用和分子機制不明，需深入研究。 本項目利用免疫共沉澱、GST pull-down技術，發現TRPV1與EGFR存在相互作用，並且確定TRPV1的C端與EGFR相互作用。利用TRPV1 的C端GST 融合蛋白，並構建磷酸化位點突變體，通過激酶實驗，發現EGFR 可以磷酸化大鼠TRPV1 的Y738位點，相當於人TRPV1 的Y739位點；通過構建大鼠TRPV1野生型、磷酸化位點失活突變體 Y738F及磷酸化位點模擬活化突變體 Y738E真核表達質粒，採用全細胞膜片鉗技術檢測TRPV1通道特性，發現EGFR對TRPV1的磷酸化影響TRPV1通道瞬時門控和電位變化，EGFR磷酸化TRPV1 的Y738位點導致TRPV1通道對辣椒素更敏感；採用QPCR和Western Blot，發現TRPV1在皮膚癌、鼻咽癌、結腸癌、乳腺癌、肝癌等多種腫瘤細胞中表達。TRPV1在鼻咽癌組織、肺癌組織中表達下調，並且TRPV1高表達有利於肺癌病人的存活； 研究發現TRPV1促進鼻咽癌細胞SUNE1和CNE1增殖和遷移， 並且抑制CNE1細胞IL6、 IL8、IL11的表達水平。利用磷酸化位點突變體，發現TRPV1野生型抑制肺癌細胞增殖，TRPV1激活突變體逆轉抑制作用；發現TRPV1激活劑辣椒素在鼻咽癌細胞CNE2、SUNE1中，促進細胞凋亡、抑制細胞增殖、遷移和荷瘤小鼠腫瘤形成，並發現P38及上游激酶介導了辣椒素對鼻咽癌的抑癌作用。 本項目的研究初步揭示了TRPV1及EGFR磷酸化TRPV1在腫瘤發生髮展中的作用和相關的下游信號通路，為相關的腫瘤診斷與靶向治療提供了新的重要實驗證據。至今，已發表標註本項目資助的SCI論文7篇，培養博士後2名、研究生3名。完成項目預期的目標和任務。