《肺癌發生與轉移相關的miRNA的驗證與功能研究》是依託復旦大學，由盧韶華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肺癌發生與轉移相關的miRNA的驗證與功能研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：盧韶華
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目旨在對與肺癌發生和轉移相關的miRNA 進行驗證，並對其功能進行研究。我們前期工作通過雷射捕獲顯微分離系統從不同類型肺癌組織中分離純淨的癌細胞，運用Agilent晶片技術進行全基因組miRNA差異表達分析，已篩選出14個尚未報導的在肺腺癌、鱗癌及小細胞癌中明顯相關且顯著差異表達的miRNA分子標誌物，並建立了miRNA功能研究的實驗平台。本研究擬通過實時螢光定量RT-PCR方法，對這些miRNA於300 例肺癌組織進行驗證；並通過侵襲和遷移實驗檢驗miRNA對肺癌細胞系侵襲和遷移能力的影響；利用TargetScan等生物資料庫和降解組測序法，查找這些miRNA與肺癌發生可能的相關靶基因；通過與轉染實驗相結合的Western-blot、酶譜法和螢光素酶活性檢測對靶基因進行鑑定，從而闡明miRNA在肺癌發生和轉移過程中的生物學功能，為肺癌分子分型提供新的理論依據，為肺癌治療提供新的靶點。
結題摘要
本項目經過3年努力，已順利完成實驗研究。通過雷射顯微分離技術從82例肺癌中分離出純淨的肺癌細胞，運用Agilent晶片技術進行全基因組miRNA差異表達分析，篩選出7個在不同類型肺癌中顯著差異表達的miRNA。並於215例石蠟包埋的手術切除肺癌組織進行定量逆轉錄-聚合酶鏈反應檢測，由此建立兩個數學模型，能準確鑑別SCLC與NSCLC和SQ與AC。並將該兩個數學模型套用於207例肺癌支氣管刷檢樣本中進行驗證，結果示上述miRNA組合能準確鑑別SCLC 與 NSCLC（miR-29a與miR-375, AUC 0.947）和 SQ 與AC（miR-34a與miR-205, AUC 0.962）。同時，運用miRecords和KEGG等資料庫，預測篩選出37個可能參與調節SCLC相關信號通路的miR-375候選靶基因。並運用實時螢光定量 RT-PCR（SYBR® Green法）在組織水平對上述靶基因進行進一步篩選。並通過與轉染實驗相結合的螢光定量RT-PCR、Western-blot和螢光素酶活性檢測實驗進行功能研究。預測並驗證了miR-375的靶基因PIAS1，結合已報導的PIAS1在細胞調控中的多種作用，提示miR-375在SCLC發病分子機制中具有重要作用，並有望成為SCLC診斷與治療的潛在靶點。其中一篇論文發表在呼吸領域最權威的學術期刊（American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2012, 通訊作者，影響因子11.08分），且AJRCCM雜誌就該論文研究內容的重要性及臨床套用前景進行了專題評述，並申請相關專利（201210338988.3、PCT/ CN2010/073563）；一篇論文已發表於Chinese Medical Journal（Engl）；另一篇論文已投稿BMC Genomics。2013年10月應邀參加第十五屆國際肺癌大會，並作大會發言（Title：miRNAs Biomarker and Lung Cancer），並受邀主持其中Techniques and Platforms session。2013年被評為上海市醫學會病理學分會青年委員； 培養研究生2名，並順利畢業。
