《薑黃素抗肺癌中特異性miRNA的篩選及功能研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由張艱擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：薑黃素抗肺癌中特異性miRNA的篩選及功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張艱
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
薑黃素是傳統中藥薑黃的主要成分，其廣譜的抗癌作用及低毒性在體內外研究已得到國際公認，從而使薑黃素成為美國國立衛生院等醫療機構開展臨床Ⅰ期研究的熱點。肺癌近幾年發病率仍居惡性腫瘤前兩位，死亡率居第一位，其治療學中的難點仍然是化療失敗及患者不能難受的毒副反應，因此尋找低毒有效的藥物迫在眉睫。我們前期已在肺癌單細胞株中發現miR-186*等參與了薑黃素誘導癌細胞凋亡的作用，奠定了miRNA分子成為薑黃素抗肺癌的藥物靶點。我們擬採用microarray、qT-PCR、基因報告系統及建立穩定的慢病毒載體細胞系，進一步擴展薑黃素體內、外抗肺癌多種病理類型的miRNA研究，尋找有共性和個體化的miRNA分子，為薑黃素在肺癌的臨床Ⅰ期研究提供理論基礎。
結題摘要
運用高通量miRNAs晶片，我們發現薑黃素可以調控肺癌H460和H661細胞miRNAs表達，從中篩選出8個發生顯著變化的miRNAs分子（上調或下調超過2倍）進行實時定量PCR驗證，miR-183-5p，miR-132-3p，miR-124-3p，miR-192-5p，miR-215，miR-194-5p發生明顯上調，miR-223-3p和miR-602發生明顯下調。其中，miR-192-5p和miR-215在薑黃素作用下出現的變化最為明顯，後續的功能研究集中於這兩個miRNAs分子。 將體外合成的miR-192-5p/215的前體轉染H460和H661細胞，我們發現細胞出現明顯的G2/M周期阻滯和凋亡。我們預先將miR-192-5p/215抑制物轉染H460和H661細胞，隨後給予肺癌細胞薑黃素處理髮現G2/M期和凋亡細胞比例減少，提示拮抗薑黃素誘導的miR-192-5p/215上調會減弱其殺傷腫瘤細胞的作用，即薑黃素抗肺癌的效應依賴miR-192-5p和miR-215的上調。 我們對薑黃素上調miR-192-5p/215的機制進行了較為深入的研究，結果顯示p53是介導miR-192-5p/215上調的關鍵轉錄因子，p53 siRNA或缺失後，薑黃素喪失對miR-192-5p/215的表達調控作用。 本課題的最後一項內容是明確miR-192-5p/215作用的靶基因。生物信息學的研究手段預測XIAP是miR-192-5p/215的可能作用靶點。螢光素酶報告基因和Western blot均證實miR-192-5p/215可引起XIAP mRNA及蛋白質的表達減少。薑黃素也能夠下調p53陽性肺癌細胞XIAP的表達而不能影響p53陰性肺癌細胞XIAP的表達。 綜上所述，本課題在肯定薑黃素殺傷肺癌細胞的基礎上首次證明薑黃素-p53-miR-192-5p/215-XIAP是發揮該藥物抗癌作用的新機制，後續對這一機制的拓展研究有望促使薑黃素走進臨床用於肺癌輔助治療。
