《非小細胞肺癌中黃連素干預TF/FVIIa通路抑制轉移的作用研究》是依託同濟大學，由范理宏擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：非小細胞肺癌中黃連素干預TF/FVIIa通路抑制轉移的作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：范理宏
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
肺癌轉移是非小細胞肺癌(NSCLC)主要死因，組織因子(TF)是腫瘤播散與轉移的關鍵因素。利用低毒高效中藥調控TF影響肺癌轉移機制國內外尚無報導。我們前期研究證實黃連素（BBR）能夠抑制NSCLC細胞侵襲與遷移，並發現其能抑制TF表達，通過螢光素酶報告實驗發現miRNA19a/20a能靶向TF，且BBR能夠上調TF相關miRNA表達。因此我們推測BBR通過上調相關miRNA調控TF/FVIIa通路抑制NSCLC的轉移。本課題擬進一步1、在晚期合併血栓NSCLC組織中驗證TF及相關miRNA表達；2、細胞水平驗證不同濃度BBR干預下TF及相關miRNA表達情況，並通過TF功能性獲得或缺失驗證BBR干預下TF/FVIIa通路及下游轉移蛋白和血管生成相關基因表達情況；3、構建正位肺癌移植裸鼠及TF條件性基因敲除小鼠，進一步探索BBR上調miRNA調控TF/FVIIa通路在肺癌中的轉移機制。
結題摘要
肺癌轉移是非小細胞肺癌(NSCLC)主要死因，組織因子(TF)是腫瘤播散與轉移的關鍵因素。利用低毒高效中藥調控TF影響肺癌轉移機制國內外尚無報導。我們前期研究證實黃連素（BBR）能夠抑制NSCLC細胞侵襲與遷移，並發現其能抑制TF表達，通過螢光素酶報告實驗發現miRNA-19a能靶向TF，且BBR能夠上調TF相關miRNA表達。本課題組前期已經證明將hsa-miR-19a-mimic或hsa-miR-19a-inhibitor 轉染PC9 細胞後發現,hsa-miR-19a-mimic 可抑制細胞增殖，阻滯細胞於G0/G1 期， 下調TF 的表達；hsa-miR-19ainhibitor則可促進細胞增殖，促進細胞周期進程,上調TF 的表達,並進一步檢測NSCLC患者血清中TF的表達水平，TF的表達越高預後越差。本研究旨在通過鑑定黃連素作用於miR-19a來完善我們之前的研究，並評估其在肺癌中的生物學功能。我們進一步通過QRT-PCR測定不同濃度黃連素處理腫瘤細胞後miR-19a 、TF的表達情況。cck8實驗測定BBR對轉染hsa-miR-19ainhibitor或 TF-overexpression肺癌細胞的增殖能力，流式方法檢測BBR對轉染hsa-miR-19ainhibitor或 TF-overexpression的肺癌細胞中凋亡比例， Western blotting方法檢測BBR對轉染hsa-miR-19ainhibitor或 TF-overexpression的肺癌細胞中凋亡相關蛋白表達的影響，動物實驗檢測BBR對A549、PC9肺癌細胞異體移植瘤的作用。結果發現，黃連素通過上調miR-19a的表達抑制細胞增殖和誘導細胞凋亡來抑制NSCLC生長並可能通過miR-19a/ TF激活MAPK通路起到腫瘤抑制劑的作用。
