《miR-126對內皮祖細胞功能的調節作用及機制研究》是依託上海交通大學，由劉博擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-126對內皮祖細胞功能的調節作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉博
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
內皮祖細胞（EPC）在維持內皮細胞內環境穩定和促進血管修復中起關鍵作用。高血壓時存在EPC功能失常，但調控機制尚不明確，同源盒基因9（HOXA9）可直接作用於EphB4基因影響EPC功能,但EPC功能障礙過程中HOXA9表達通過何種機制調控、如何影響EPC功能尚未報導。本課題組前期研究表明miR-126在高血壓大鼠外周血及EPC中低表達，上調其表達可促進內皮細胞的增殖和遷移能力。生物信息學分析提示miR-126與HOXA9的3'UTR區互補結合，本研究擬首先證實miR-126能靶向抑制HOXA9表達；繼而，驗證miR-126可通過下調HOXA9影響內皮祖細胞的功能，包括小管形成、細胞遷移和粘附等，從而促進內皮功能修復；最後，動物在體驗證miR-126是通過靶向於HOXA9分子而調控EPC功能的各環節。明確miR-126調節EPC功能的機制可為高血壓等心腦血管疾病的治療提供新的方向。
結題摘要
高血壓是我國患病率最高的一種慢性疾病，血壓導致的內皮損傷和修復之間動態平衡的破壞是引起腦卒中、冠心病等心腦血管疾病的重要原因。內皮祖細胞（EPC）在維持內皮細胞內環境穩定和促進血管修復中起關鍵作用，臨床研究證實，EPC功能與高血壓、糖尿病等心腦血管疾病危險因素呈負相關，高血壓時存在EPC 功能失常，但調控機制尚不明確，同源盒基因9（HOXA9）可直接作用於EphB4 基因影響EPC 功能,但EPC 功能障礙過程中HOXA9 表達通過何種機制調控、如何影響EPC 功能尚未報導。前期研究表明miR-126 在高血壓大鼠外周血及EPC 中低表達，上調其表達可促進內皮細胞的增殖和遷移能力。生物信息學分析提示miR-126 與HOXA9 的3'UTR 區互補結合，本研究首先通過雙螢光素酶報告載體技術及定點突變方法，確證miR-126 對HOXA9mRNA 表達的調控機制；其次，利用過表達及反義寡核苷酸技術，改變骨髓來源EPC 細胞系中miR-126 表達水平，檢測HOXA9 表達水平改變，從而鑑定miR-126 對EPC 中HOXA9 表達的調控功能；同時，檢測EPC 的小管成型、細胞遷移、細胞粘附及TSP-1 蛋白的形成能力等EPC 功能變化情況，驗證miR-126 對HOXA9 的調控效應。最後，通過體內定向轉染技術，在高血壓大鼠模型中驗證miR-126 調控HOXA9 表達從而影響EPC 功能的各環節。結果表明：高血壓大鼠外周血內皮祖細胞數量與對照組相比明顯減少。且減少水平與血壓水平呈正比，現高血壓大鼠內皮祖細胞中miR-126的表達水平明顯增加，但western blot 分析提示HOXA9的表達水平降低。且在高血壓大鼠的內皮祖細胞中miR-126的表達水平與血壓水平呈正比，我們證實，HOXA9是miR-126的靶基因。當下調內皮祖細胞中miR-126的表達量時，HOXA9的表達量增加。進一步，在動物模型中過表達HOXA9時能夠促進EPC 的小管成型、細胞遷移、細胞粘附能力，而下調HOXA9的表達能夠逆轉下調miR-126表達導致的促血管生成表型。這表明miR-126在血管發育過程中可能通過調控靶基因HOXA9的表達起重要作用。同時內皮細胞高表達的miR-126能夠同時靶向VEGF，結果能夠間接降低內皮祖細胞內一些炎症分子的表達。這些研究已取得了一系列的成果。
