miR-126通過靶向CXCR4調控RhoA通路抑制結腸癌轉移的機制研究

《miR-126通過靶向CXCR4調控RhoA通路抑制結腸癌轉移的機制研究》是依託中南大學，由王曉艷擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：miR-126通過靶向CXCR4調控RhoA通路抑制結腸癌轉移的機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：王曉艷
• 依託單位：中南大學

項目摘要

本課題組研究發現miR-126可抑制結腸癌轉移，基因晶片等技術初步揭示miR-126可能靶向CXCR4負調控RhoA通路發揮作用。本課題將採用基因過表達及沉默技術研究miR-126對結腸癌轉移指標EMT、血管生成的影響，並用裸鼠移植瘤活體成像技術證實其抑制轉移的功能。為明確miR-126的作用機制，本課題將研究miR-126過表達和沉默對結腸癌中CXCR4及RhoA通路活性的調控作用。進一步在miR-126過表達和沉默結腸癌細胞中分別逆轉CXCR4及RhoA的表達，採用體內外轉移實驗及蛋白印跡等技術明確CXCR4及RhoA是否為miR-126抑制轉移的關鍵節點；採用IP探究CXCR4與RhoA、RhoGEF和ARHGAP5的互動作用；並在結腸癌組織中驗證上述分子的表達及其與轉移、生存率的關係，闡明結腸癌中miR-126→CXCR4→RhoA通路的轉移抑制機制，為結腸癌轉移診治提供新靶點。

結題摘要

前期發現miR-126在體外能抑制結腸癌細胞增殖及侵襲轉移。CXCR4為miR-126直接負調控的靶基因，且miR-126負性調控RhoA通路。然而miR-126在結腸癌中發揮抑癌作用的具體機制尚不明確。本研究中，在細胞水平、動物水平及人結腸癌組織水平三個層面探討了miR-126對結腸癌的侵襲轉移的抑制作用及機制。本課題按照研究計畫進行。通過構建miR-126穩定過表達、沉默結腸癌細胞模型及皮下移植瘤模型和尾靜脈肺轉移模型，發現miR-126能抑制結腸癌生長及侵襲轉移（P小於0.05）及EMT的發生。通過原位雜交分析發現miR-126在人結腸癌組織中表達下調，且其表達與結腸癌患者TNM分期及轉移明顯負相關（P小於0.05）；生存分析證實低表達miR-126的結腸癌患者生存預後更差（P小於0.05）；相關分析提示結腸癌中miR-126表達與CXCR4及RhoA通路重要分子表達明顯負相關（P小於0.05）。採用Real-time PCR、Western Blot及RhoA G-LISA等技術在穩定miR-126過表達及沉默結腸癌細胞中分析發現miR-126能負性調控CXCR4的表達及RhoA通路的活性，提示其可能為miR-126的抑癌機制。進一步在miR-126穩定過表達或沉默結腸癌細胞中恢復CXCR4的表達後，能改變miR-126對結腸癌生物學行為的抑制作用（p小於0.05）及對RhoA信號通路的負調控作用（p小於0.05），提示CXCR4為miR-126調控RhoA通路發揮抑癌作用的關鍵節點。通過蛋白互動作用及RhoA G-LISA實驗證實結腸癌中CXCR4可能通過Ga13調控RhoA通路。在miR-126穩定過表達或沉默結腸癌細胞中恢復RhoA的表達後，能逆轉miR-126對結腸癌生物學行為的抑制作用、EMT發生及RhoA通路的負調控作用（p小於 0.05），提示結腸癌中RhoA通路為 miR-126 發揮生物學功能的關鍵通路。通過本課題的完成，闡明了miR-126在結腸癌中通過靶向CXCR4調控RhoA通路發揮抑制結腸癌轉移的作用。miR-126可以作為結腸癌的預後標誌及潛在治療靶標。有望為臨床上結腸癌的治療提供新的理論依據和生物治療策略。一系列結果在Oncotarget、Int J Clin Exp Med、Mol Cell Biochem等重要期刊上發表。