miR-126調節對糖尿病環境下內皮祖細胞歸巢的影響和機制

《miR-126調節對糖尿病環境下內皮祖細胞歸巢的影響和機制》是依託上海交通大學，由孟舒擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：miR-126調節對糖尿病環境下內皮祖細胞歸巢的影響和機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：孟舒
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

CXCR4表達下調致 SDF-1α/CXCR4調控障礙是糖尿病機體EPCs歸巢損傷的重要機制。前期我們發現，糖尿病患者EPCs上miR-126低表達降低EPCs遷移、增殖，增加凋亡；通過靶基因spred-1調控多條信號通路。本研究將論證miR-126通過上調EPCs上CXCR4表達，從而促進SDF-1α/CXCR4信號通路調控的糖尿病機體EPCs歸巢的作用和相關機制。我們擬以高血糖EPCs為研究對象，正負兩方面探討miR-126對EPCs上CXCR4表達的影響及其在SDF-1α誘導的EPCs定向遷移中的作用和信號通路；明確2型糖尿病環境對EPCs上miR-126表達和轉錄後調控的影響；並在糖尿病GK大鼠體內驗證。本研究將為揭示糖尿病機體EPCs歸巢的轉錄後調控機制提供新的思路。

結題摘要

糖尿病患者內皮祖細胞（EPCs）上的miR-126下調，並伴有遷移功能障礙。本研究旨在闡明miR-126通過SDF-1α/CXCR4信號軸調控EPCs歸巢功能的作用機制。分離並培養大鼠骨髓來源的EPCs。不同濃度的高糖（HG）和糖基化終末產物（AGEs）誘導EPCs。MTT 檢測最佳濃度。Realtime-PCR檢測EPCs上miR-126的表達，Western Blot檢測相關蛋白表達，流式細胞儀和螢光顯微鏡檢測EPCs細胞內ROS水平，ELISA檢測上清液中炎症炎症因子的表達。不同濃度的SDF-1α誘導EPCs，transwell檢測使EPCs遷移的最適濃度。構建過表達 miR-126和下調miR-126的慢病毒載體，並轉染EPCs。加入最佳濃度的SDF-1α，雷射共聚焦、RT-PCR和Western blot檢測不同時間點EPCs的CXCR4以及信號蛋白的表達。建立頸總動脈損傷的GK大鼠模型；提取wista大鼠骨髓來源的EPCs；術後通過尾靜脈向GK大鼠注射PBS和不同病毒載體轉染的EPCs；檢測大鼠頸動脈損傷處再內皮化程度及內膜增生情況，並進一步檢測大鼠體內空腹血糖、AGEs、炎症因子的表達。研究發現HG和AGEs降低EPCs上miR-126的表達、增加ROS和炎症因子的表達。miR-126負性調控ROS和炎症因子的表達。miR-126體外通過激活ERK/VEGF and AKT/eNOS 信號通路顯著增加CXCR4的表達，並改善EPCs的遷移能力；體內改善內皮修復、抑制內膜增生。研究表明二型糖尿病患者EPCs歸巢能力異常，可能是由於miR-126下調，抑制ERK/VEGF and AKT/eNOS 信號通路，降低EPCs上CXCR4的表達所導致，這一機制最終影響糖尿病患者內皮修復功能。