《長鏈非編碼RNA在肝癌中的臨床意義及作用機制的研究》是依託中山大學，由王輝雲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：長鏈非編碼RNA在肝癌中的臨床意義及作用機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王輝雲
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
長鏈非編碼RNA（lncRNA）是一類長度超過200個核苷酸的非編碼RNA,作用廣泛,並與腫瘤的發生髮展密切相關，已成為一個新的研究熱點。申請者前期通過自製晶片對50例肝癌中lncRNA表達譜進行了初步的研究，發現一組表達標籤能準確地區分癌和非癌組織，其中LCRR在肝癌中顯著上調，並與病人的復發和生存密切相關。在此基礎上，本課題擬收集300例肝癌繼續採用晶片檢測lncRNA表達譜，以鑑定出可用於肝癌診斷和預後評估的標籤；RT-PCR驗證LCRR表達後，結合臨床資料分析，明確其在臨床中的作用和意義；構建LCRR穩定上調和下調的細胞株，觀察其對肝癌細胞各種生物學特性的影響及其在動物體內對肝癌成瘤和轉移的作用；用晶片檢測穩定株的基因表達譜、線上資料庫預測和RNA-蛋白下拉試驗等鑑定出LCRR的結合蛋白及其信號通路，用實驗方法證實信號通路基因，從而闡明其分子作用機制，為臨床套用提供理論和實驗依據。
結題摘要
本項目基本按照計畫順利進行，完成了研究內容和目標，培養了多名研究生，發表了標註本課題資助號的SCI文章7篇，正在投稿Hepatology雜誌一篇和申請一個專利。主要研究成果如下：我們收集了616例肝癌病例（原計畫為300例），分為發現組、驗證組和獨立組1（院內）和獨立組2（院外）四組。以自制晶片分析了發現組 127對肝癌及癌旁組織的LncRNA表達譜，建立了一個9-LncRNA標籤,其區分肝癌和癌旁組織的準確率達了98.8%；生存分析發現17個LncRNA與肝癌患者的預後明顯相關，通過風險分數模型篩選出一個4-LncRNA標籤，能有效地預測病人生存時間，而且其是一個獨立的預後因素；採用RT-PCR方法檢測了這4個LncRNA在驗證組、獨立組1和獨立組2中的表達水平，並驗證了這一標籤的預後預測作用；當4-LncRNA分標籤和臨床分期系統（TNM和BCLC分期）組成聯合預測模型時，其預後評估效率明顯優於單獨的臨床分期或4-LncRNA標籤。以上結果曾經投稿Lancet雜誌，現在重新修改後準備投稿Hepatology，而且正在將4-LncRNA標籤申請專利。接著，我們對標籤中的2個lncRNA在肝癌中的生物學功能及其機制進行了深入的研究：RP11-134O21.1在肝癌中表達升高，與病人的預後差相關；體外實驗顯示，上調此lncRNA的表達可顯著提高肝癌細胞系的增殖、克隆形成、遷移、侵襲能力和上皮間質轉化（EMT），下調其表達則得到相反的結果；體內實驗表明，上調其表達可促進肝癌在裸鼠皮下成瘤和肺部轉移灶的形成；在機制方面，表達譜晶片檢測發現其主要調控細胞核內DNA轉錄相關的通路相關；RNA下拉實驗與質譜檢測相結合，篩選出此RP11-134O21.1與HSPA4(HSP70)蛋白結合，與表達譜晶片結果相印證。第二個LncRNA為XLOC_012786，其在肝癌中表達下降，與病人預後差相關；體外實驗顯示，其過表達可顯著抑制肝癌細胞系的增殖、克隆形成、遷移、侵襲和EMT；體內實驗表明，其過表達可抑制裸鼠肝癌移植瘤和肺轉移灶的形成；全基因組表達譜晶片檢測結果顯示其可調控PI3K-Akt信號通路；蛋白免疫印跡檢測顯示，其過表達導致了磷酸化的AKT、S6與4EBP1下降、敲降則上調它們的磷酸化，這一結果顯示此LncRNA通過抑制AKT通路磷酸化來阻抑肝癌的轉移。此結果正在撰寫論文。
