《長鏈非編碼RNA AK000151在結直腸癌發生髮展中的功能研究》是依託復旦大學，由蔡明琰擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：長鏈非編碼RNA AK000151在結直腸癌發生髮展中的功能研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：蔡明琰
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
長鏈非編碼RNA （long noncoding RNAs，lncRNAs）因其在致癌與腫瘤抑制途徑中顯露出的潛在作用而成為腫瘤研究的新熱點。但是在腺瘤-腺癌途徑中, lncRNAs的作用仍待進一步研究。本研究基於前期基因表達微陣列晶片技術和基因功能註解資料庫，篩選出與結直腸癌發生髮展相關的目標lncRNAs；經過篩選、文獻查閱和RT-PCR驗證，對感興趣的lncRNA AK000151在腸癌細胞發生髮展進行進一步的功能研究，初步探究lncRNA影響結直腸癌發生髮展可能涉及的分子機制。
結題摘要
第一部分 LncRNA AK000151對人腸癌細胞體外生長遷移、侵襲能力 的影響 方法：在不同腸癌細胞系用定量PCR法檢測lncRNA AK000151的相對表達量。構建lncRNA AK000151干擾與過表達質粒，顯著下調或上調lncRNA AK000151表達水平後，觀察該lncRNA對結直腸癌細胞增殖、遷移、侵襲等生物學功能的影響。 結果：lncRNA AK000151在CL187細胞中相對高表達，而在SW620細胞中相對低表達。用AK000151干擾與過表達慢病毒顆粒分別轉染CL187細胞與SW620細胞，穩定上調SW620，下調CL187細胞中AK000151的表達水平。MTT實驗及克隆形成實驗發現AK000151能顯著促進腸癌細胞的增殖， transwell實驗發現AK000151能顯著促進結直腸癌細胞的遷移及侵襲能力。 結論：lncRNA AK000151能顯著促進腸癌細胞的增殖，遷移和侵襲能力。 第二部分 LncRNA AK000151對荷瘤裸鼠腫瘤生長的影響 方法：利用穩轉的過表達細胞株SW620和干擾細胞株CL187, 構建皮下移植瘤模型。 結果：在干擾組裸鼠中，干擾後的腸癌細胞皮下成瘤的速度及大小顯著低於對照組，進而影響裸鼠體重，也出現顯著差異。在過表達組裸鼠中，lncRNA過表達組的皮下腫瘤體積明顯大於對照組，但過表達組裸鼠的體重與對照組相比無顯著差異。 結論：lncRNA AK000151在人腸癌細胞系SW620中過表達後，能顯著促進裸鼠皮下瘤的生長；其在人腸癌細胞系CL187被干擾後，能抑制裸鼠皮下瘤的生長。 第三部分 LncRNA AK000151促進腫瘤發展的初步機制研究 方法：通過基因序列比對，發現lncRNA AK000151為PBRM1內含子上的一個反向互補序列。利用RT-PCR法檢測前兩部分細胞中、裸鼠實驗中腫瘤及臨床標本中lncRNA AK000151和PBRM1的表達量。 結果：比對照組裸鼠，干擾後裸鼠腫瘤內lncRNA AK000151的表達量下降，PBRM1的表達量上升，兩者的變化均有顯著統計學差異（P＜0.001）。在過表達組實驗裸鼠腫瘤中，過表達前後裸鼠腫瘤內lncRNA AK000151的表達量上升，PBRM1的表達量下降，兩者的變化均有顯著統計學差異 （P＜0.001）。兩者的相關係數為r =-0.
