《腫瘤間質細胞GFRα1表達促進胃癌轉移的機制研究》是依託北京大學，由劉兆君擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：腫瘤間質細胞GFRα1表達促進胃癌轉移的機制研究
- 項目負責人：劉兆君
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
GFRα1是神經膠質細胞營養因子GDNF的膜受體，能夠促進神經元細胞的發育和遷移，在多種腫瘤中表達上調，具有癌基因的作用。我們前期在篩選腫瘤轉移甲基化標誌物時發現，GFRα1在胃癌組織中存在去甲基化活化，GFRα1甲基化與胃癌的發生和轉移及患者的預後呈負相關關係。免疫組化分析顯示，GFRα1在正常胃/胃炎中不表達，在胃癌組織及癌旁組織中高表達；且同以往其它腫瘤的研究不同，在胃癌中GFRα1僅在間質細胞表達。鑒於腫瘤間質細胞在腫瘤轉移過程中的重要作用，本項目擬在上述工作的基礎上，(1)明確GFRα1表達的間質細胞類型； (2)研究GFRα1在間質細胞表達促進胃癌轉移的生物學作用和相關機制；(3)分析GDNF/ GFRα1在肌成纖維細胞促進腫瘤進展中的作用；(4)探索用GFRa1特異性抗體和蛋白激酶抑制劑等阻斷GFRa1及其下游信號通路是否具有抑制腫瘤細胞生長和阻斷腫瘤轉移的作用。
結題摘要
GFRα1是神經膠質細胞營養因子GDNF的膜受體，能夠促進神經元細胞的發育和遷移，在多種腫瘤中表達上調。我們前期在篩選腫瘤轉移甲基化標誌物時發現，GFRα1在胃癌組織中存在去甲基化活化，GFRα1甲基化與胃癌的發生和轉移及患者的預後呈負相關關係。免疫組化分析顯示，GFRα1在正常胃/胃炎中不表達，在胃癌組織及癌旁組織中高表達；且胃癌中GFRα1僅在間質細胞表達。本項目中，我們發現（1）初始模板量對以PCR分析為基礎的GFRα1甲基化的檢測結果有重要影響；（2）GFRα1甲基化具有預測胃癌轉移的作用；（2）成纖維細胞GFRα1表達是其促進胃癌轉移的主要途徑，通過RET信號通路發揮作用；（3）GFRα1特異性抗體可以阻斷腫瘤細胞的遷移能力。具體如下： 首先為了建立穩定的GFRα1甲基化分析方法，保證實驗結果的穩定性，用於後續樣品的檢測，我們系統地研究了初始模板量對GFRα1甲基化檢測結果的影響，確定MethyLight分析所需最小模板量是9.4ng，排除假陰性結果。在此基礎上，進一步在163例早期胃癌患者中開展前瞻佇列研究，證明GFRα1甲基化降低胃癌患者轉移的風險（9.1% vs.19.8%；校正OR=0.351, 95%CI：0.131-0.938），可作為預測胃癌轉移的標誌物。 其次，利用雷射捕獲顯微切割技術，分離胃癌實質和間質，確定GFRA1表達在腫瘤間質中。進而利用生物信息學及RT-PCR分析，鑑定GFRA1 mRNA主要表達在成纖維細胞中發揮促進胃癌轉移的作用，且主要通過RET信號通路發揮作用。進一步，開展抗體阻斷實驗，發現GFRA1抗體可以有效的抑制腫瘤細胞的遷移能力。
