胃癌Sp1啟動子區自身調控機制的研究

《胃癌Sp1啟動子區自身調控機制的研究》是依託上海交通大學，由王理偉擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：胃癌Sp1啟動子區自身調控機制的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：王理偉
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

本課題組研究發現：轉錄因子Sp1的高表達在胃癌的生長、浸潤、轉移及腫瘤血管新生等過程中起著重要作用，是胃癌靶向治療的一個關鍵靶點；且其啟動子區的自我調控是引起Sp1高表達的重要因素，其具體機制可能與Sp1啟動子區單核苷酸多態性（SNP）和/或核苷酸突變相關。本研究以上述發現為基礎，套用已建立的胃癌標本庫和臨床資料庫，使用高通量SNP分型技術和DNA測序技術，篩選Sp1啟動子區單核苷酸多態性和突變位點，研究它們對Sp1轉錄活性的影響以及Sp1自調控作用的機制，探討Sp1啟動子與Sp1表達和活性的相關性，以期深入了解Sp1啟動子與其轉錄調控的關係，進一步研究轉錄因子Sp1在胃癌發生髮展中作用的分子機制。以上研究尚未見報導，闡明Sp1啟動子區自身調控機制，將為為胃癌的病因學和靶向治療研究提供新的線索。

結題摘要

胃癌是人類最常見的惡性腫瘤之一。在世界範圍內，胃癌的死亡率居所有惡性腫瘤第二位。中國是胃癌的高發地區，全世界42％的胃癌新發病例在中國。本課題組前期研究發現轉錄因子Sp1的高表達在胃癌的生長、浸潤、轉移及腫瘤血管新生等過程中起著重要作用，是胃癌靶向治療的一個關鍵靶點。啟動子區啟動基因表達，其異常涉及腫瘤的發生髮展，Sp1在胃癌中的高表達與其啟動子遺傳變異是否相關目前未見報導。本研究基於既往的臨床病理資料庫和組織晶片庫基礎上，通過DNA測序，篩選出3個Sp1啟動子區突變位點(C-684T, T-617G和T-637C)，分析表明它們在胃癌中的發生率分別為3.96 %、1.98%以及5.94%。分別構建含有上述3個位點突變啟動子的螢光素酶 (luciferase) 報告基因質粒，轉染SGC7901，N87和293T細胞後進行luciferase檢測，結果顯示，含有C-684T和T-617G突變的螢光素酶報告基因相對螢光值（relative luciferase activity , RLA）明顯高於對照組（P＜0.01），而T-637C突變則無此現象（P = 0.319）。通過細胞轉染，將含有上述突變位點的表達質粒轉染293T細胞，Western-blot檢測Sp1蛋白表達水平，結果表明含有C-684T和T-617G突變啟動子的Sp1質粒表達水平顯著升高（P＜0.01），而T-637C位點突變則無顯著變化。接下來對這3個突變位點和Sp1結合能力進行了分析，染色質免疫共沉澱 (Chromatin Immunoprecipitation, CHIP) 結果表明，C-684T和T-617G突變使Sp1轉錄活性增加（P＜0.05），而T-637C突變則無增加Sp1轉錄活性效應。以上研究結果表明，啟動子區突變（C-684T和T-617G）使Sp1蛋白表達水平升高，顯著促進Sp1自身轉錄活性，是驅動胃癌細胞中Sp1異常表達的重要機制之一，這一結果有助對臨床高危人群進行早期干預、對胃癌患者治療預後做出評判，並為針對突變作為特異治療靶點進行深入研究打下堅實基礎。