《miR-218多靶點調控Sp1-Slit/Robo-srGAP2信號通路抑制胃癌轉移的實驗研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由帖君擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-218多靶點調控Sp1-Slit/Robo-srGAP2信號通路抑制胃癌轉移的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：帖君
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
我們前期研究證實miR-218通過下調Robo1抑制胃癌轉移。然而Robo1 siRNA抑制胃癌侵襲的能力遠低於miR-218，提示Robo1隻是其靶基因之一，miR-218的分子機制仍未闡明。RIP-chip聯合iTRAQ對miR-218靶基因進一步篩選的結果表明Robo2，srGAP2，Sp1也可能是其靶基因，其中Sp1調控Robo1、Robo2，是Slit/Robo通路的上游分子，srGAP2是Slit/Robo的下游分子。基於此我們提出了miR-218多靶點調控Sp1-Slit/Robo-srGAP2信號通路抑制胃癌轉移的理論假設。本項目將通過ChIP、EMSA、截短體報告基因實驗研究Sp1對Robo1、Robo2的調控機制，通過干預、拮抗實驗研究miR-218多靶點調控Sp1-Slit/Robo-srGAP2通路對胃癌轉移的影響，為以miR-218為靶點的基因治療提供理論基礎。
結題摘要
前期研究中，我們發現miR-218通過調控Slit2/Robo1信號通路抑制胃癌轉移。然而用RNAi 降低Robo1的表達時，胃癌細胞的遷移、侵襲能力降低，但其降低的程度遠遠低於miR-218過表達時的效果。提示Robo1隻是介導miR-218參與胃癌轉移的靶基因之一。我們用RIP-chip聯合iTRAQ高通量的方法對miR-218調控胃癌轉移的靶基因進行了進一步的挖掘。結合生物信息學分析，提出了： miR-218多靶點調控POU2F2-Slit/Robo-srGAP2信號通路抑制胃癌轉移的理論假設。然後從以下四個方面進行了研究：1. POU2F2對Robo1直接表達調控的研究。結果發現POU2F2在高轉移潛能的胃癌細胞中表達升高，降低其表達抑制胃癌轉移。POU2F2通過結合ROBO1啟動子區 -880～ -873正性調控ROBO1的轉錄表達。2. NF-ƙB直接激活POU2F2在胃癌轉移中的轉錄。在胃癌細胞中POU2F2的表達水平與NF-ƙB的活性顯著正相關，NF-ƙB通過結合POU2F2啟動子區-531 ～ -522區域調控POU2F2。3. POU2F2是NF-ƙB 和 slit2/Robo1信號通路的聯接點。NF-Kb活化誘導POU2F2過表達，表達升高的POU2F2上調膜受體ROBO1，活化Slit2/ROBO1信號通路，促使胃癌細胞轉移。4. miR-218同時抑制IKK-β、POU2F2、ROBO1基因，抑制NF-Kb和Slit/ROBO1信號通路活性抑制胃癌轉移。 本研究不僅發現了2個新的miR-218的靶基因，並且揭示了一個以218為中心的調控網路：Slit2-miR-218-(NF-kB/ POU2F2/Robo1)。在這一相互作用網路中，miR-218的表達缺失，失去對IKK-β的翻譯抑制，使NF-Kb活化，激活POU2F2的轉錄，使其過表達，POU2F2的表達導致ROBO1表達上調，與其配體Slit2相互作用後，活化Slit2/ROBO1信號通路，促進胃癌的侵襲和轉移。而miR-218可同時直接調節Slit2-(NF-kB/ POU2F2/Robo1) axis上多個基因的表達，分別從轉錄因子、膜受體不同的層面同時抑制這一信號通路的活性，抑制胃癌的侵襲和轉移。
