《SOX2-miR-218/Slit-Robo1通路參與胃癌轉移的分子機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李孟彬擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：SOX2-miR-218/Slit-Robo1通路參與胃癌轉移的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李孟彬
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
轉移是胃癌患者致死的主要原因，其分子機制仍不清楚。我們前期研究發現，胃癌中表達缺失的miR-218導致其靶基因Robo1過表達，Robo1通過與配體Slit2相互作用，促進胃癌細胞的侵襲和轉移。然而，miR-218在胃癌中表達缺失的原因尚不清楚，其在胃癌轉移中的作用機制仍需進一步研究和闡明。我們近期又研究發現，SOX2在胃癌中與miR-218的表達趨勢一致，生物信息學分析也提示miR-218的啟動子區有多個SOX2的結合位點。基於此，我們提出了SOX2-miR-218/Slit-Robo1信號通路的理論假設。本項目將在前期工作的基礎上，利用ChIP、EMSA、報告基因等技術，研究SOX2對miR-218的直接轉錄調控作用；再用功能獲得性和功能缺失性方法，分別在體外和體內研究這一信號通路在胃癌轉移中的作用，探索針對這一信號通路逆轉胃癌轉移的分子策略，以進一步加深對胃癌轉移發生機制的理解。
結題摘要
在實驗過程中發現SOX2並不能直接調控miR-218，於是我們對SOX2的功能及下游分子機制進行了深入研究。 主要研究結果： 1.SOX2的表達水平與胃癌發生進程中臨床病理參數的分析結果提示，SOX2在正常胃黏膜、腸化、不典型增生、胃癌以及轉移灶中表達逐漸降低。SOX2的表達降低與胃癌的分化程度、TNM分期及患者預後密切相關，並可作胃癌患者預後的獨立預測指標。 2. 與對照細胞相比，在胃癌細胞中高表達SOX2後，WST-1、裸鼠成瘤實驗及Ki67免疫組化染色結果表明胃癌細胞生長減慢；流式細胞術及組織細胞凋亡小體染色顯示細胞凋亡增加；Transwell遷移、侵襲實驗以及裸鼠尾靜脈注射內臟轉移實驗均提示胃癌細胞的侵襲和轉移能力減弱；但細胞周期無明顯變化。 3. ChIP-GLS技術發現，胃癌細胞中有718個蛋白質編碼基因的啟動子能與SOX2結合；表達譜晶片結果顯示，SOX2過表達後細胞差異表達的基因有320個。取兩者的交集，共有11個基因，其中2個表達上調，9個表達下調。生物信息學分析表明，PTEN作為表達上調的基因可能是SOX2直接調控的靶基因。 4. ChIP-PCR、EMSA、螢光素酶報告基因實驗以及一系列功能學實驗技術證實，SOX2通過上調PTEN， PTEN使Rb去磷酸化來抑制胃癌細胞生長增殖，阻止胃癌細胞凋亡，並削弱其侵襲遷移能力，而對細胞周期並未產生影響。 5. 用免疫組化檢測SOX2、PTEN、Rb在203例癌/癌旁配對組織中表達，結果發現SOX2與PTEN的表達正相關，與 pRb的表達負相關。SOX2與PTEN、Rb聯合在判斷胃癌預後中有重要臨床意義，根據SOX2、PTEN的表達情況，將胃癌患者分為SOX2（+）PTEN（+），SOX2（+）PTEN（-），SOX2（-）PTEN（+），SOX2（-）PTEN（-）四組，結果提示SOX2、PTEN表達同時降低，Rb表達升高的患者其預後更差。 結論： 1. SOX2在胃癌前病變中已發生顯著的表達降低，SOX2表達降低是胃癌發生過程中的早期事件。SOX2的表達變化在判斷胃癌患者預後中有潛在的臨床價值。 2與癌旁組織相比，胃癌中SOX2表達下調的患者臨床預後較差；SOX2、PTEN表達同時降低，Rb表達升高的患者預後更差。 3.過表達SOX2可通過上調PTEN，使Rb去磷酸化抑制胃癌細胞生長並阻止其遠處轉移。
