《光動力學療法（PDT）上調膠質瘤細胞TAP1表達的轉錄調控機制》是依託中山大學，由李方成擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：光動力學療法(PDT)上調膠質瘤細胞TAP1表達的轉錄調控機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李方成
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
我們首次發現，光動力學療法（PDT）處理可上調膠質瘤細胞抗原轉運相關蛋白TAP1,從而提高腫瘤細胞免疫原性，激活抗腫瘤免疫，對增強PDT療效有著重大的意義。但膠質瘤細胞TAP1基因上調的轉錄調控機制是什麼？至今尚不清楚！本項目擬建立PDT處理人腦膠質瘤細胞模型，在TAP1啟動子螢光素酶報告載體基礎上構建5＇端刪除連續突變體重組子，確立PDT誘導TAP1表達的啟動子核心區以及可能存在的轉錄因子結合位點。進而用EMSA技術確定TAP1基因啟動子核心區的結合序列是否能夠與這些轉錄因子結合；ChIP方法獲得轉錄因子與TAP1啟動子核心區在細胞內結合的證據。並用SiRNA和構建的轉錄因子真核表達載體抑制/增強轉錄因子表達，觀察TAP1啟動子核心區已知轉錄因子（Sp1、CREB、NF-κB等）的結合序列是否介導了TAP1基因的轉錄調控。進一步闡明PDT處理下膠質瘤細胞TAP1基因上調的轉錄調控機制。
結題摘要
本課題是以前工作的繼續和深入。在前期工作中，本課題組利用弱酸洗脫法，獲取PDT處理後腫瘤細胞表面MHC-I類結合肽，反覆衝擊致敏自體DC，成功製備DC疫苗,並檢測CTL活性。結果發現， PDT處理後所誘發的體外細胞毒效應明顯增強，腫瘤細胞抗原免疫原性也顯著提高。上述試驗結果已以數篇論文形式發表。為了進一步探討PDT增強腫瘤細胞免疫原性的分子生物學機制，本研究組對抗原加工處理呈遞相關分子中核心蛋白TAP1進行了研究，結果發現：PDT上調膠質瘤細胞TAP1基因轉錄及蛋白表達；PDT增強TAP1轉運抗原肽的活性繼而增加MHC-I:抗原肽複合體在膠質瘤細胞表面的展示，最終激活CTL。這是我們首次發現並予報導，相關結果已發表於國際神經腫瘤領域著名期刊《journal of neuro-oncology》。 我們使用miRCURYTM LNA Array對光敏劑HMME光動力處理後人膠質瘤細胞及未處理人膠質瘤細胞的miRNA表達譜進行了檢測，發現結果顯示，共79個miRNA表達水平在膠質瘤細胞PDT處理前後存在明顯差異，其中光動力處理後表達上調的有43個，表達下調的有36個。生物信息學分析顯示多個在PDT處理後表達下調的miRNA以TAP1或NF-κB為靶基因，這表明TAP1基因的表達受到miRNA的直接調控或者由miRNA調節NF-κB而間接調控TAP1基因的表達。我們的預實驗也證實在PDT處理後人膠質瘤細胞的TAP1以及NF-κB基因的表達水平顯著升高 我們套用慢病毒載體系統（Tronolab公司）構建並裝配攜帶miR-346的慢病毒載體（Lenti-miR-346），鑑定慢病毒載體轉染效率後，將其轉導人膠質瘤U251細胞，並通過慢病毒攜帶的GFP報告基因分選轉導成功的細胞。
