肝細胞癌轉移相關蛋白的功能研究

《肝細胞癌轉移相關蛋白的功能研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由姜穎擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：肝細胞癌轉移相關蛋白的功能研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：姜穎
• 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院

中文摘要

肝細胞癌的轉移是影響治療效果和預後的最大障礙，但其轉移的分子機制仍不明確，尚無可用於肝細胞癌轉移復發臨床檢測的生物標誌物和有效的治療靶標。本研究在前期大規模構建與肝細胞轉移相關的差異蛋白質譜基礎上，系統篩選出可能與肝細胞癌轉移相關的候選蛋白，以具備較高轉移能力、表達較高水平候選蛋白的HCC97H細胞株為研究對象，採用RNA干涉技術沉默其表達，獲得基因沉默的穩定細胞株，而後在體外觀察基因沉默後對腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移的影響，以及對荷瘤裸鼠模型生存期和腫瘤轉移情況的影響，以此來鑑定候選蛋白與肝細胞癌轉移的相關性；並在此基礎上研究候選蛋白參與肝細胞癌轉移的分子機制，由此進一步探討肝細胞癌轉移的機理。在肝細胞癌發病率日益增高的現狀下，本研究為為進一步闡明HCC轉移的分子機制提供依據，為臨床的診斷和治療奠定基礎，並有可能成為具有原創性的治療靶標。

結題摘要

前期研究發現Rab27B分子在高轉移細胞株表達上調，因此可作為潛在的HCC轉移關鍵蛋白進行深層次的功能驗證。HCC的轉移過程中涉及到細胞的增殖、黏附、遷移和侵襲等方面的性質，因此本研究也從這幾個方面進行。首先，在體外通過實驗比較shRab27B、mock和HCC97H細胞株的增殖、黏附、遷移和侵襲能力，結果顯示穩定敲低Rab27B的HCC97H細胞株shRab27B細胞與mock及HCC97H細胞相比，其體外貼壁增殖、黏附、遷移和侵襲能力均顯著下降，這說明Rab27B表達量的降低抑制細胞的轉移過程，也即體外實驗證明Rab27B與HCC的轉移過程相關。隨後，進一步通過體內實驗即裸鼠荷瘤轉移模型進行驗證，通過向裸鼠脾臟接種shRab27B和mock細胞，觀察腫瘤的肝臟轉移及肺臟轉移情況，接種細胞8周后mock組肝臟腫瘤轉移灶質量要顯著大於shRab27B組，且接種shRab27B組肝臟轉移灶出現的時間要顯著晚於mock組的出現時間，這表明Rab27B表達的降低抑制了HCC97H細胞的裸鼠體內的轉移和侵襲能力。通過體內外實驗確定Rab27B與HCC的轉移相關。在確定Rab27B與HCC轉移相關的基礎上，進一步探討其參與HCC轉移的機制，即其是如何調控HCC轉移過程的。Rab27B主要參與調控細胞的囊泡運輸過程，在細胞內囊泡定位運輸至胞膜的過程中發揮了重要作用，因此，我們推斷Rab27B表達量的降低抑制了HCC97H細胞的囊泡分泌過程，從而降低了參與HCC轉移的重要分子的分泌量。經過實驗驗證，可知在胞外分泌蛋白中，shRab27B細胞分泌的尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）和肝細胞生長因子（HGF）的量與mock和HCC97H細胞相比顯著下降，uPA和HGF及其受體在腫瘤的轉移過程中發揮了重要的作用。因此，我們確定HCC97H細胞中Rab27B表達量的降低抑制了uPA和HGF的分泌過程，從而抑制了HCC97H細胞的轉移過程。隨後收集不同時期HCC病人臨床血清，通過ELISA實驗測定Rab27B的表達量，在已發生轉移的HCC病人血清中Rab27B的含量要顯著高於未發生轉移的，因此Rab27B可作為診斷HCC轉移的潛在標誌物用於臨床診斷。