ZIPK基因抑制胃癌分子機制的深入研究

《ZIPK基因抑制胃癌分子機制的深入研究》是依託中山大學，由畢熲擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：ZIPK基因抑制胃癌分子機制的深入研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：畢熲
• 依託單位：中山大學

中文摘要

通過比較基因組雜交微陣列(CGH-array)技術我們發現胃癌在19p13.3出現高頻缺失，在此區域的ZIPK基因具有抑癌基因的特徵並與腫瘤細胞的凋亡相關。據文獻報導ZIPK誘導細胞凋亡和自噬，ZIPK是如何調節腫瘤細胞凋亡和自噬的機制仍不清楚。本研究採用細胞轉染和RNA干擾技術觀察ZIPK對胃癌細胞株的凋亡和自噬影響，檢測ZIPK對MDM2-P53、Par-4信號通路影響，期望探明ZIPK通過調節P53和Par-4通路的信號促進腫瘤細胞的凋亡;通過噬菌體文庫展示技術篩選與ZIPK共同作用調節自噬的分子，觀察ZIPK及靶分子對胃癌細胞自噬功能的調節，確立ZIPK誘導自噬的分子通路。同時在臨床胃癌組織中驗證內源性ZIPK的調節機制，並分析ZIPK誘導凋亡和自噬的相關分子信號的臨床腫瘤學的意義。本課題的研究將有助於闡明ZIPK抑制胃癌的分子機制，為深入理解胃癌的發病機制，具有重要的理論價值。

結題摘要

按照課題計畫ZIPK基因轉染至胃癌細胞系BGC823、 MKN28，經篩選獲得兩種穩定高表達ZIPK的胃癌細胞系，並用shRNA 敲除了正常胃上皮細胞Ges-1 ZIPK的表達，構建了ZIPK低表達胃上皮細胞系。在BGC823高表達細胞系中，軟瓊脂集落生成實驗和Foci平面克隆實驗以及CCK-8細胞增殖實驗證明高表達ZIPK促進細胞的增殖和生長。在裸鼠腫瘤細胞局部種植和尾靜脈注射模型中我們觀察到ZIPK促進了癌細胞的生長和轉移。Western blot 的結果顯示ZIPK誘導AKT的活化（磷酸化ser473），並增加vimentin 和 βcatenin的表達。該結果提示ZIPK促進上皮基質轉化。在MKN28細胞中， ZIPK的高表達抑制了細胞的軟瓊脂集落，ZIPK在MKN28中還可以促進細胞的自噬。Western blot的結果顯示ZIPK抑制AKT（ser473）的磷酸化。在正常胃上皮細胞Ges-1中，ZIPK的低表達抑制了自噬的發生。 按照課題的設計，套用流式細胞術Annexin V聯合PI法測定MKN28和 BGC823細胞的凋亡數，Western blot檢測了caspase3、caspase9, PARP表達的變化，都未發現ZIPK與凋亡有明確的關聯。 本課題基本完成了預期的研究內容，證實ZIPK可能通過抑制AKT通路促進自噬抑制腫瘤的生長；ZIPK也可在某些特定的條件下可活化AKT通路促進腫瘤的生長和轉移，以上的發現尚未見報導。本研究用的BGC28細胞為未分化癌，其分子背景與MKN28及Ges-1細胞系有較大的不同，這種差異可能是造成ZIPK激活不同分子通路的原因。ZIPK即可活化也可抑制AKT通路，但在何種情況下發揮哪種作用以及有哪些分子信號介入尚不清楚，這將成為我們感興趣研究的下一個目標。