《microRNA let-7f抑制胃癌轉移的分子機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由張德新擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA let-7f抑制胃癌轉移的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張德新
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
胃癌轉移是導致治療失敗和患者死亡的主要原因，其確切機制仍不清楚。microRNA可通過作用於多基因、多信號途徑在轉錄後水平發揮重要的調控作用，但其在胃癌轉移中的機制尚未闡明。我們前期在胃癌轉移細胞株GC9811-P中敲除有促轉移作用的轉錄因子SRF後，發現多個miRNA差異表達。進一步對表達上調顯著的miRNA進行表達驗證和功能研究，發現其中let-7f在胃癌轉移灶中低表達且能顯著抑制胃癌轉移。本項目擬採用生物信息學結合分子生物學方法，高通量篩選let-7f的靶基因，運用高內涵系統批量研究靶基因功能，並利用免疫共沉澱、表面電漿共振和干預實驗等深入研究let-7f靶基因相互作用及其在轉移相關信號通路中發揮的作用，以尋找出有實質性網路調控作用的關鍵效應分子。本項目旨在揭示let-7f通過調控多基因、多信號途徑抑制胃癌轉移的分子機制，為胃癌轉移早期預警和靶向干預提供理論和實驗依據。
結題摘要
胃癌的死亡率一直居高不下，其中胃癌轉移是導致胃癌患者死亡和治療失敗的主要原因，而轉移的分子機制尚不清楚。本實驗通過研究對兩株轉移能力不同的胃癌轉移細胞系進行microRNA晶片分析，發現多個可抑制胃癌轉移的miRNA，其中以let-7f 抑制胃癌轉移作用最為顯著。主要研究內容：1.通過qRT-PCR的方法檢驗let-7f-5p在胃癌細胞中的表達，轉染let-7f-5p的類似物及抑制物通過transwe11實驗檢驗let-7f-5p對胃癌轉移的影響；2.通過生物信息學預測的方法預測let-7f-5p的靶基因，並運用qRT-PCR、雙螢光素酶報告基因實驗及Westernblot實驗驗證let-7f-5p與其靶基因的調控關係；3、通過免疫組化和實時螢光定量PCR實驗驗證let-7f-5p靶基因在胃癌及癌旁組織之間的表達。結果:一，在胃癌高低轉移細胞系MKN28M、MKN28NM中驗證了let-7f-5p在胃癌高轉移細胞系中低表達，在胃癌低轉移細胞系中高表達；在高轉移細胞系MKN28M中轉染let-7f-5p的類似物使其上調，在低轉移細胞系MKN28NM細胞系中轉染let-7t-5p的抑制物使let-7F5p下調，通過tanswell遷移和侵襲實驗發現let-7f-5p與胃癌細胞的遷移能力和侵襲能力呈負相關關係。二，通過生物信息學預測的方法發現FNDC3B 與人MMP11的3’-UTR上有與let-7f-5p結合位點，通過雙螢光素酶報告基因實驗和Westernblot驗證了let-7f-5p通過與FNDC3BmRNA的3’-UTR直接結合從而下調FNDC3B，通過Westernblot驗證了MMP11可能為let-7f-5p的下游靶基因。三，我們使用小干擾RNA技術使FNDC3B下調，發現下調FNDC3B的表達可抑制胃癌細胞的粘附、遷移和侵襲能力，下調FNDC3B還可抑制MMP分子的表達，同時可上調viminten 的表達。本課題旨在驗證let-7f-5p與胃癌惡性表型的關係，揭示其影響轉移的機制，為胃癌的診斷、治療和轉移預測提供合理依據。
