胃癌中ATF3表達抑制的分子機制研究

《胃癌中ATF3表達抑制的分子機制研究》是依託上海交通大學，由謝國化擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：胃癌中ATF3表達抑制的分子機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：謝國化
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

ATF3是含亮氨酸拉鏈結構的激活轉錄因子，作為早期應激反應蛋白，具有廣泛的轉錄調節作用。本課題組組化分析發現ATF3在胃癌組織中表達下調。Western blot實驗顯示：腫瘤切除組織中ATF3蛋白表達量顯著低於癌旁組織。進一步研究發現：COX-2處理胃癌細胞導致細胞凋亡增高同時ATF3蛋白表達量也顯著提高，siRNA干擾ATF3蛋白表達後，細胞凋亡率降低。這些結果表明，ATF3蛋白異常表達與胃癌相關，但確切的功能與分子作用機制尚有待於深入研究。基於此，本項目擬採用組織晶片、免疫組化、免疫螢光、表達譜晶片、Western blot、siRNA干擾和真核基因表達等系列實驗手段，研究ATF3在胃癌中的表達與功能及其相關細胞信號轉導通路，初步構建ATF3在腫瘤細胞中行使功能的信號通路。本項目有望揭示胃癌中ATF3表達抑制的分子機制，為ATF3在腫瘤的預防、早期治療以及預後等方面帶來一些新的思路。

結題摘要

本研究通過real time PCR、Western blot、共聚焦、免疫組化和分子生物學等手段分析了胃癌細胞ATF3的表達情況，並通過ATF3過表達和干擾表達慢病毒感染相應胃癌細胞株結合動物實驗以及結合ATF3靶基因啟動子螢光素酶分析實驗，取得以下實驗成果：① ATF3蛋白在部分胃癌組織中呈現低表達並且低表達ATF3的胃癌患者預後較差。② 體內外實驗發現過表達ATF3胃癌細胞增殖和克隆形成能力受阻。③ 體內外實驗發現干擾表達ATF3胃癌細胞增殖和克隆形成能力增強。④體內外實驗發現過表達ATF3胃癌細胞遷移侵襲能力減弱，而干擾ATF3蛋白表達後，其遷移侵襲能力增強。⑤實驗發現ATF3過表達不影響胃癌細胞的周期，也不引起胃癌細胞的顯著凋亡，但會顯著增加化療藥物誘導的胃癌細胞凋亡。⑥胃癌細胞經LPS刺激1h 即可誘導高水平ATF3蛋白表達，過表達ATF3抑制免疫抑制性細胞因子分泌，抑制KLF6基因的轉錄。⑦ 螢光素酶啟動子活性分析發現，過表達ATF3抑制NF-KB啟動子活性，並抑制NF-KB p65亞基的磷酸化水平，同時抑制早期生長反應因子EGR-1蛋白的表達。該項目發現ATF3可通過調控腫瘤微環境和相應腫瘤增殖轉移相關蛋白的轉錄表達參與胃癌進程。