《泛素在HPV持續感染時對TLR功能的作用機制研究》是依託浙江大學，由程浩擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：泛素在HPV持續感染時對TLR功能的作用機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：程浩
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
人類乳頭瘤病毒（HPV）造成的持續感染和細胞惡性轉化與機體免疫反應密切相關但機制至今不明。Toll樣受體(TLR)在天然免疫中至關重要，而泛素是TLR介導的宿主免疫反應關鍵調節因素之一。基於課題組對HPV感染的多年研究，本項目擬在建立HPV感染的原代人鱗狀上皮細胞株的基礎上，通過研究尖銳濕疣主要感染的HPV 6b、11型和亞洲地區宮頸癌高發的HPV58型的主要致病基因E6/E7蛋白對TLR的表達、信號通路及其功能的影響來研究HPV與TLR的相互作用；通過研究HPV感染細胞內泛素對TLR信號通路及其功能的影響來研究HPV對泛素系統的作用，以期進一步揭示HPV感染對泛素-蛋白酶體途徑及泛素信號傳導通路、宿主抗病毒免疫反應的影響及作用機制。研究結果將豐富HPV致病的分子免疫學機制的研究，並有利於HPV感染的防治策略研究。具有較深遠的學術意義和社會意義。
結題摘要
目的 研究低危型HPV感染機制對有效控制尖銳濕疣(CA)具有重要意義。本課題研究低危型HPV病毒E7蛋白對朗格漢斯細胞(LC) TLR信號通路的調控作用，並分析泛素系統在其中的作用。方法 誘導人外周血單核細胞分化為LC，以HPV6b E7及各TLR激動劑刺激48h，PCR、流式細胞儀、WB檢測TLR的表達，WB檢測TLR信號通路分子的表達及磷酸化水平。繼而以表達HPV6b / 11E6或E7基因的質粒轉染HEK293細胞，或以小鼠DC2.4細胞負載HPV6b / 11 E7蛋白，再給予TLR激動劑刺激48h後收穫細胞，WB檢測泛素及泛素酶的表達。 結果 (1) HPV 6b E7蛋白刺激後LC細胞TLR3、4、10基因表達下調，TLR9基因表達明顯上調，TLR3/7/8/9蛋白的表達則無明顯改變； (2) LC經HPV 6b /11 E7蛋白刺激後，IRAK1蛋白表達顯著下調， TLR激動劑刺激不能逆轉其下調。HPV E7蛋白刺激或HPV E7蛋白聯合TLR激動劑刺激細胞TRAF6、MyD88、IRAK4、IRF3、IRF7蛋白表達及IRAK4、IRF3、IRF7蛋白磷酸化水平無明顯統計學差異。PCR結果則提示單純HPVE7蛋白組IRAK1基因mRNA的表達略低於空白對照組。 (3)、HPV6b型和11型的E6基因能上調HEK293細胞泛素表達，E6和E7基因均能上調UB1a/b和UBE2N，而E7基因下調UBCH5C的表達。HPV6b / 11E7蛋白刺激均不影響小鼠DC2.4細胞泛素表達， 多數TLR激動劑對其泛素表達無影響，而BCG刺激可導致泛素明顯下降，並且與 UBE1a/b、UbcH5C 和UBE2N的表達一致。UBE2L3表達均無明顯變化。結論 (1)低危型HPV E7蛋白改變LC細胞TLR基因的表達，而TLR蛋白表達無明顯改變，其中可能涉及泛素及泛素酶的作用；(2) 低危型HPV E7蛋白可通過干擾IRAK1蛋白分子的表達干擾TLR信號通路，部分通過IRAK1基因的下調； (3)與E7蛋白相比，細胞泛素化機制對E6蛋白的反應更為明顯，低危型HPVE7蛋白對細胞泛素化的調控可能更依賴於泛素結合酶E2。
