《miR-372調控宮頸癌細胞周期的機制研究》是依託天津醫科大學，由湯華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-372調控宮頸癌細胞周期的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：湯華
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
MiRNAs通過在轉錄後水平負調控靶基因的表達而參與多種生理和病理過程。本項目前期研究表明miR-372通過減慢細胞從S期向G2期過渡導致HeLa細胞生長受到抑制。此外，miR-372在宮頸癌組織中低表達提示miR-372在宮頸癌中可能起到抑癌基因的作用。採用cDNA晶片技術和生物信息學相結合的方法，我們篩選到了miR-372的3個與細胞周期調控相關的候選靶基因。本項目擬通過GFP融合報告載體技術結合實時定量PCR和Western印跡方法來驗證miR-372的直接靶基因及其可能的作用方式，同時利用RNA干擾及挽救實驗確定靶基因在宮頸癌細胞增殖中的作用，闡明miR-372調節細胞周期進程的分子機制；並通過檢測臨床組織標本中miR-372和靶基因的表達水平，以及裸鼠腫瘤移植實驗確定異常miR-372表達與宮頸癌生長的關係，為宮頸癌的診斷和發現治療性靶標提供理論基礎和實驗依據。
結題摘要
微小RNA通過在轉錄後水平負調控靶基因的表達而參與多種生理和病理過程。隨著研究的深入，越來越多的證據顯示miRNA與腫瘤的發生密切相關。宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發病率在女性惡性腫瘤中居第二位。在我國每年約有13.5萬宮頸癌新發病例，並呈年輕化及上升趨勢，死亡率占中國女性癌症的第二位。本項目在期研究中得到：（1） miR-372通過減慢細胞從S期向G2期過渡導致HeLa細胞生長受到抑制；（2）miR-372在宮頸癌組織中低表達提示miR-372在宮頸癌中可能起到抑癌基因的作用；（3）採用cDNA晶片技術和生物信息學相結合的方法，篩選到了miR-372的3個與細胞周期調控相關的候選靶基因。在此基礎上，本項目通過GFP融合報告載體技術結合實時定量PCR和Western印跡方法來驗證了CDK2和CyclinA1為miR-372的直接靶基因，miR-372通過剪下CDK2和CyclinA1的mRNA並抑制其蛋白質合成的作用方式發揮作用，同時利用RNA干擾及挽救實驗確定了下調CDK2和CyclinA1在宮頸癌細胞中發揮抑制細胞周期的作用，闡明了miR-372通過負調控CDK2和CyclinA1從而調節細胞周期進程的分子機制；檢測了臨床組織標本中miR-372表達水平下調而CDK2及CyclinA1的表達水平上調，裸鼠腫瘤移植實驗確定了異常miR-372低表達與宮頸癌生長正相關，過表達miR-372可以抑制宮頸癌生長，為宮頸癌的診斷和發現治療性靶標提供理論基礎和實驗依據。
