《微小RNA-302調控胚胎母胚轉換的機制研究》是依託南京大學，由丁利軍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：微小RNA-302調控胚胎母胚轉換的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：丁利軍
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
人類胚胎體外發育阻滯是造成可移植胚胎獲得率低的主要原因，也是制約輔助生殖技術成功的關鍵因素之一。胚胎髮育阻滯與合子基因組激活，母型mRNA降解等母胚轉換事件密切相關。文獻報導MicroRNA是斑馬魚胚胎基因組激活和母型mRNA降解的關鍵調節分子。我們最近的研究發現miR-302在小鼠胚胎1-細胞期開始表達，2-細胞後期至4-細胞期（母胚轉換期）高表達，隨後表達下降。序列分析與靶基因掃描顯示miR-302靶基因包含多種母型mRNA，其可能在人類胚胎母胚轉換過程中起到關鍵的調節作用。本研究通過胚胎微注射、基因微陣列等方法驗證miR-302在母胚轉換中的作用，分析靶向母型mRNA的路徑，以此闡明miRNA在哺乳動物胚胎母胚轉換過程中的調控機制，對人類胚胎髮育阻滯分子機理進行探索，以期為生殖醫學中完善體外胚胎培養與選擇體系奠定基礎。
結題摘要
母胚轉換包括胚胎合子基因組激活和母型mRNA降解兩個關鍵事件，母胚轉換失敗是造成胚胎髮育阻滯的重要原因。研究發現microRNAs參與斑馬魚母胚轉換過程中母型mRNA的降解。本研究採用基因晶片與實時定量PCR的方法檢測母胚轉換前後多種miRNAs的表達，發現miR-302在小鼠胚胎母胚轉換期高表達。序列分析與靶基因掃描顯示miR-302靶基因包含多種母型mRNA，其可能在人類胚胎母胚轉換過程中起到關鍵的調節作用。通過胚胎顯微注射技術，將miRNA的抑制劑和過表達質粒注入小鼠1-cell胚胎胞質中發現，miR-302低表達或高表達均影響胚胎早期發育。螢光素酶雙報告基因和Western-blot實驗證實，重要的細胞周期調控基因，母型基因CCND1和PCAF是miR-302s的靶基因，說明miR-302s在胚胎髮育早期的細胞周期調控中起到重要作用。利用條件性基因敲除系統（Cre-loxp系統），我們製備條件性敲除miR-302s的基因工程小鼠，分析了胚胎敲除miR-302s後的發育表型。此外，我們的研究還發現miR-302s可以抑制腫瘤細胞的成瘤性，阻滯Ishikawa細胞周期於G2/M期。本研究闡明miRNA在胚胎母胚轉換過程中的調控機制，對人類胚胎髮育阻滯的分子機理進行探索，為胚胎體外培養與體外選擇提供了新的依據。
