《MMP-9通過TGF-β/Smad信號通路調控犬乳腺腫瘤轉移的機制》是依託中國農業大學，由林德貴擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MMP-9通過TGF-β/Smad信號通路調控犬乳腺腫瘤轉移的機制
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：林德貴
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
轉移是腫瘤引起宿主死亡的主要原因，而發生轉移的前提是形成特定的腫瘤微環境。MMP-9在腫瘤微環境形成過程中發揮作用，但具體的機制仍不完全清楚。我們的前期研究發現犬乳腺腫瘤組織中MMP-9的高表達與腫瘤的惡性程度和轉移呈正相關，因此推測MMP-9是調控犬乳腺腫瘤轉移的重要因素之一。在前期研究的基礎上，我們從組織和細胞學、基因和蛋白表達等多方面對MMP-9調控犬乳腺腫瘤轉移的過程和分子機制進行闡述，並探討靶向抑制MMP-9的活性對犬乳腺腫瘤轉移的潛在影響。通過建立體內和體外犬乳腺腫瘤轉移研究模型，重點闡述MMP-9對腫瘤的侵襲和轉移的影響，以及在TGF-β信號通路中的作用，並通過RT-PCR、免疫印跡、免疫染色、基因干擾、抑制劑處理等手段進行驗證。本研究有望揭示犬乳腺腫瘤細胞的轉移機制，發現抑制腫瘤轉移的新藥物。
結題摘要
研究背景：乳腺腫瘤組織中MMP-9的高表達與腫瘤的惡性程度和轉移呈正相關，因此推測MMP-9是調控犬乳腺腫瘤轉移的重要因素之一。在前期研究的基礎上，我們從組織和細胞學、基因和蛋白表達等多方面對MMP-9調控犬乳腺腫瘤轉移的過程和分子機制進行闡述，並探討靶向抑制MMP-9的活性對犬乳腺腫瘤轉移的潛在影響。研究內容：1.收集臨床病例，製作石蠟切片，免疫組織化學分析惡性乳腺腫瘤分級種類預後與MMP9表達的相關性。2.通過體外酶活抑制試驗檢測36種小分子藥物對於MMP9的影響，篩選確定合適的抗MMP9活性的小分子藥物。3.通過CCK8，細胞克隆實驗，檢測大車前苷（PMS）對腫瘤細胞的抑制作用。4.利用RT-PCR和Wesetern Blot技術，分析MMP9對TGF-beta/SMAD信號通路的調控作用。研究結果：1.免疫組織化學分析顯示，MMP9表達上升與腫瘤惡性程度升高預後變差呈現正相關。MMP9高表達組相對於低表達組犬平均存活時間更短，腫瘤惡性程度更高。2.體外酶活實驗證明結果顯示 24 種小分子降低了 MMP-9 在體外的酶活性，另外 13 種反而使其酶活性增加（圖 3S-1），而 PMS 的抑制效果最強，極顯著降低了 MMP-9 的酶活性（P＜0.01）。之後從 24 種小分子中遴選出 7 種進行了分子對接計算，分子結合產生自由能越小則結合力越強。PMS 與 MMP-9 的分子結合自由能為-10.39 kcal/mol，顯著低於平均值。3.PMS對細胞活性檢測顯示其對腫瘤細胞有顯著抑制生長左右，但對正常細胞CHO則無明顯作用。4.通過過表達MMP9與使用MMP9抑制劑，實驗確定MMP9可通過促進TGF-beta前體複合物Large latent Complex（LLC）水解為Small Latent Complex（SLC）從而增加TGF-beta的活化來調控TGF-beta的表達，從而促進下游信號通路SMAD相關蛋白表達最終來促進細胞的增殖遷移。科學意義：結合實驗數據，表明大車前苷（PMS）可通過抑制MMP9的活性，從而抑制TGF-beta/SMAD信號通路的活化來抑制細胞的增殖分化與侵襲能力。為PMS作為中藥提取物抗腫瘤提供了理論基礎。
