《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》是中山市中智藥業集團有限公司於2009年11月6日申請的發明專利，該專利的公布號為CN101850066A，專利公布日為2010年10月6日，發明人是成金樂、徐吉銀、陳勇軍。
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》所述中藥組合物顆粒劑包括如下重量組分的破壁粉體：西洋參破壁粉體3-18份、三七破壁粉體1-24份、石斛破壁粉體6-36份、丹參破壁粉體9-45份，所述破壁粉體的粒度為D90在5-75微米之間。該發明還提供了製備該中藥組合物顆粒劑的方法，取D90在5-75微米之間的西洋參破壁粉體、三七破壁粉體、石斛破壁粉體、丹參破壁粉體，混勻，採用濃度大於20vol％的含水乙醇製成軟材，經10-30目篩的制粒機制粒後烘乾、整粒即得。
2017年12月11日，《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》獲得第十九屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：中藥組合物顆粒劑及其製備方法
- 公布號：CN101850066A
- 公布日：2010年10月6日
- 申請號：2009102114203
- 申請日：2009年11月6日
- 申請人：中山市中智藥業集團有限公司
- 地址：廣東省中山市火炬開發區康泰路南3號
- Int. Cl.：A61K36/8984(2006.01)I、A61K9/16(2006.01)I、A61P9/00(2006.01)I、A61P37/04(2006.01)I、A61P39/00(2006.01)I
- 專利代理機構：北京市立方律師事務所
- 代理人：張磊
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽稱號,
專利背景
亞健康是人體免疫能力低下所造成的，它是介於健康與疾病之間的一種中間狀態，通過運用現代的儀器或檢測方法卻不能檢測出陽性指標，或者雖有部分指標的改變，但是尚未達到西醫學疾病的診斷標準。這種處於健康和疾病之間的狀態稱為“亞健康狀態”。這種狀態如不及時加以干預，有可能進一步發展為疾病。例如比較常見的心腦血管疾病和肝損傷類的疾病。
截至2009年11月，中國每年因心腦血管病所致死亡者約占總死亡構成比45％左右，心腦血管疾病已經成為危害人類生命健康的第一殺手，並有發病年齡逐步年輕化的趨勢。究其原因，主要是人們的飲食結構和生活方式發生了巨大的變化，飲食結構普遍趨向於高脂肪、高熱量、高鹽，加之工作壓力增大，運動量減少，這些不良的飲食結構和生活習慣是亞健康狀態的根源所在，最終導致高血黏度、高血脂、高膽固醇、冠心病、腦血栓等心腦血管疾病。
肝臟作為人體進行代謝活動的主要樞紐，不健康的生活和飲食習慣會增加肝細胞的負擔，導致肝損傷，進而影響機體的內分泌功能和血液循環，引發免疫力下降和各種亞健康狀態。
中國傳統中醫學採用的是“整體觀念”、“辨證論治”及“因人、因時、因地制宜”等特色理論體系，因而在長期調理亞健康狀態方面具有很大優勢。但是，傳統的飲片劑型由於煎煮麻煩，不便於長期服用。而中藥飲片浸膏顆粒由於是用溶劑提取了中藥飲片中的次生代謝產物，並人為丟棄部分化學成分，其並不完全符合中醫藥理論，因此在中醫臨床套用上並不能完全替代傳統飲片。
因此，非常有必要開發一種對亞健康狀態有良好的調節作用、全面利用中藥材的各種成分、符合中醫辨證論治的基本理論，且服用方便、易於推廣的中藥組合物顆粒劑。
發明內容
專利目的
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》的一個目的是提供一種對人體心腦血管系統疾病及免疫力下降、易疲勞的亞健康態，具有一定預防和調節作用的創新中藥組合物顆粒劑。該發明的另一目的是提供一種上述中藥組合物顆粒劑的製備方法。
技術方案
根據《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》的一方面，提供了一種中藥組合物顆粒劑，包括如下重量組分的破壁粉體：西洋參破壁粉體3-18份、三七破壁粉體1-24份、石斛破壁粉體6-36份、丹參破壁粉體9-45份，所述破壁粉體的粒度為D90在5-75微米之間。
根據該發明的實施方式之一，上述組合物中各組分的重量組成為：西洋參破壁粉體5-15份、三七破壁粉體3-16份、石斛破壁粉體6-20份、丹參破壁粉體10-25份。
根據該發明的實施方式之一，上述組合物中各組分的重量組成優選為：西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體9份、石斛破壁粉體12份、丹參15份。
根據該發明再一實施方式，上述組合物中各組分的重量組成優選為：西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體6份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體18份。
根據該發明的一實施方式，上述組合物中各組分的重量組成優選為：西洋參破壁粉體12份、三七破壁粉體12份、石斛破壁粉體6份、丹參破壁粉體12份。
根據該發明的另一方面，還提供了一種上述中藥組合物顆粒劑的製備方法，包括如下步驟：
取粒度為D90在5-75微米之間的西洋參破壁粉體、三七破壁粉體、石斛破壁粉體、丹參破壁粉體，混勻，採用濃度大於20vol％的含水乙醇製成軟材，經10-30目篩的制粒機制粒後烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將所述未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為20-80目的不少於所述中藥顆粒劑總重量的90％。
根據該發明的實施方式之一，烘乾的溫度控制在60-80℃之間。
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》所提供製備方法，是對中藥材進行細胞級粉碎，在粉碎過程中，中藥不同組織、不同部位經過粉碎和混煉後，各種物質組分充分暴露和勻化，形成均勻包含各種相同比例物質組分的破壁粉體，在不加任何食用或藥用輔料的條件下採用成型技術將中藥破壁粉體加工成20-80目的顆粒，可以保證同一批次統一均勻的品質。
改善效果
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》所提供的中藥組合物顆粒劑，是根據傳統中醫理論，從多種具有增強人體免疫能力的中藥材中篩選出上述4種組分，並組合出合理的配比，從而獲得了一種在預防和調節心血管系統疾病及免疫力下降易疲勞的亞健康態方面具有良好功效的中藥組合物顆粒劑。該發明的產品採用了一定粒度範圍的中藥破壁粉作為原料，屬於中藥全組分入藥，具有藥物成分配比合理、藥效高的特點；且質量均勻性高、攜帶和服用方式便捷、安全、質量穩定可控。在服用時可直接投入開水中或是湯液中，有效成分溶解迅速，服用非常方便，可以滿足現代人快節奏生活方式的要求，適合中老年人和白領亞健康人群服用。縱觀全方，恰中氣陰兩虛，瘀阻脈絡之病機，臨床療效顯著。
此外，該發明所提供的由中藥破壁粉體製成的中藥顆粒劑，將破壁粉體的粒度進行了科學的選擇，在此粒度下，植物細胞壁破壁率達到98％以上，有利於細胞壁中次生代謝產物快速溶出；同時此粒度範圍內有效成分破壞較少，保證了顆粒劑中有效成分的含量。該發明所提供的中藥顆粒劑，既克服了中藥超微破壁粉的穩定性差、流動性差的問題，同時又在保證了均勻度、分散性的前提下，有效解決了粉體的易吸濕性、易氧化性。
技術領域
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》屬於中藥領域，更具體地說，是涉及一種對人體心腦血管系統疾病及免疫力下降、易疲勞的亞健康態具有一定預防和調節作用的中藥組合物顆粒劑及其製備方法。
權利要求
1.一種中藥組合物顆粒劑，由如下重量組分的破壁粉體組成：西洋參破壁粉體3-18份、三七破壁粉體1-24份、石斛破壁粉體6-36份、丹參破壁粉體9-45份，所述破壁粉體的粒度為D90在5-75微米之間。
2.如權利要求1所述的中藥組合物顆粒劑，其中，由如下重量組分的破壁粉體組成：西洋參破壁粉體5-15份、三七破壁粉體3-16份、石斛破壁粉體6-20份、丹參破壁粉體10-25份。
3.如權利要求2所述的中藥組合物顆粒劑，其中由如下重量組分的破壁粉體組成：西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體9份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體15份。
4.如權利要求2所述的中藥組合物顆粒劑，其中，由如下重量組分的破壁粉體組成：西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體6份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體18份。
5.如權利要求2所述的中藥組合物顆粒劑，其中，由如下重量組分的破壁粉體組成：西洋參破壁粉體12份、三七破壁粉體12份、石斛破壁粉體6份、丹參破壁粉體12份。
6.如權利要求1-5任一項所述的中藥組合物顆粒劑，其中，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的總含量不低於2.0wt％。
7.如權利要求1-5任一項所述的中藥組合物顆粒劑，其中，丹參酮IIA的含量不低於0.06wt％。
8.一種如權利要求1-7任一項所述中藥組合物顆粒劑的製備方法，包括如下步驟：取D90在5-75微米之間的西洋參破壁粉體、三七破壁粉體、石斛破壁粉體、丹參破壁粉體，混勻，採用濃度大於20vol％的含水乙醇製成軟材，經10-30目篩的制粒機制粒後烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將所述未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為20-80目的不少於所述中藥顆粒劑總重量的90％。
9.如權利要求8所述的製備方法，其中，所述烘乾步驟的溫度為60-80℃。
實施方式
- 綜述
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》首先提供了一種中藥組合物顆粒劑，包括如下重量組分的破壁粉體：西洋參破壁粉體3-18份、三七破壁粉體1-24份、石斛破壁粉體6-36份、丹參破壁粉體9-45份，所述破壁粉體的粒度為D90在5-75微米之間。優選西洋參破壁粉體5-15份、三七破壁粉體3-16份、石斛破壁粉體6-20份、丹參10-25份。例如可以按照西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體9份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體15份進行配比；還可選用西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體6份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體18份；還可用西洋參破壁粉體12份、三七破壁粉體12份、石斛破壁粉體6份、丹參破壁粉體12份。
西洋參、三七組分均為五加科人參屬植物，含有的主要有效成分人參皂苷，如人參皂苷Rg1、Rg2、Re、Rb1、Rb2等，具有較強的滋補及防治心腦血管病的功效，由於兩者又具有各自獨特的化學成分，因此在功效上存在著差異，其中西洋參體味甘苦，性涼，入心肺腎三經，具有補肺降火，益氣養陰，生津滋陰，安神除煩等功能，尤以滋補強體作用見長，在該組合物中為君藥；三七則具有補氣，化瘀止血，活血定痛，生津之功，主要套用於心腦血管疾病的治療，在該組合物中為臣藥；石斛含有多糖等主要活性成分，具有增強體質，補益脾胃，護肝利膽，滋陰清熱，滋陰清熱等功效，在該組合物中為佐藥；丹參為鼠尾草屬植物，味苦，微寒，藥物活性成分為丹參酮、丹參酚酸，能改善心缺血，擴張外周血管，改善微循環，抑制血栓形成；此外還有增強免疫力，活血化痰，涼血消癰，除煩安神等功效，在該組合物中為佐藥。此方具有行氣活血，化瘀通絡，養心護肝，提高免疫力等功效。
《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》所提供的由中藥破壁粉體製成的中藥組合物顆粒劑，所用破壁粉體的粒度為D90在5-75微米之間，既可以使中藥材的細胞組織充分暴露，又不會過多地在製備中破壞中藥的有效成分，因而使得組方中各藥的有效成分的利用率顯著提高，同時服用上更加方便。
在製備該發明的上述中藥組合物顆粒劑時，首先取粒度為D90在5-75微米之間的三七破壁粉體、西洋參破壁粉體、石斛破壁粉體、丹參破壁粉體，混勻，採用常規方法滅菌後分別採用濃度大於20vol％的含水乙醇製成軟材，經10-30目篩的制粒機制粒後烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將所述未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為20-80目的不少於所述中藥顆粒劑總重量的90％，得到該發明所提供的中藥組合物顆粒劑。
製備過程中，對顆粒劑的烘乾步驟可以防止粉體在製備過程中吸潮而影響藥材質量，進而影響臨床用藥的精確性。烘乾的溫度一般選擇為60-80℃。
對破壁粉體的滅菌可以採用中藥領域技術人員所常用的方法，例如可以採用Co60輻照法，輻照劑量小於10千戈瑞。
- 實施例1
取西洋參、三七、石斛、丹參粗藥材，揀選除去其中夾雜的雜質，乾燥得淨藥材。取揀選後的淨藥材，分別超微粉碎成粒度為D90＝20微米的破壁粉體。按照重量份計，取西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體9份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體15份，混勻，採用輻照劑量為8千戈瑞的Co60輻照法滅菌後，分別用濃度為30vol％的含水乙醇製成軟材，經10目篩的制粒機制粒後，在60℃下烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為20目的占中藥顆粒劑總重量的90％，製得中藥組合物顆粒劑。
- 實施例2
取西洋參、三七、石斛、丹參粗藥材，揀選除去其中夾雜的雜質，乾燥得淨藥材。取揀選後的淨藥材，分別超微粉碎成粒度為D90＝50微米的破壁粉體。按照重量份計，取西洋參破壁粉體5份、三七破壁粉體20份、石斛破壁粉體20份、丹參破壁粉體42份，混勻，採用輻照劑量為8千戈瑞的Co60輻照法滅菌後，分別用濃度為40vol％的含水乙醇製成軟材，經30目篩的制粒機制粒後，在60℃下烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為40目的占中藥顆粒劑總重量的98％，製得中藥組合物顆粒劑。
- 實施例3
取西洋參、三七、石斛、丹參粗藥材，揀選除去其中夾雜的雜質，乾燥得淨藥材。取揀選後的淨藥材，分別超微粉碎成粒度為D90＝75微米的破壁粉體。按照重量份計，取西洋參破壁粉體6份、三七破壁粉體6份、石斛破壁粉體12份、丹參破壁粉體18份，混勻，採用輻照劑量為8千戈瑞的Co60輻照法滅菌後，分別用濃度為50vol％的含水乙醇製成軟材，經10目篩的制粒機制粒後，在80℃下烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為20目的占中藥顆粒劑總重量的96％，將各中藥顆粒混合，製得中藥組合物顆粒劑。
- 實施例4
取西洋參、三七、石斛、丹參粗藥材，揀選除去其中夾雜的雜質，乾燥得淨藥材。取揀選後的淨藥材，分別超微粉碎成粒度為D90＝5微米的破壁粉體。按照重量份計，取西洋參破壁粉體12份、三七破壁粉體12份、石斛破壁粉體6份、丹參破壁粉體12份，混勻，採用輻照劑量為8千戈瑞的Co60輻照法滅菌後，分別用濃度為40vol％的含水乙醇製成軟材，經30目篩的制粒機制粒後，在80℃下烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為80目的占中藥顆粒劑總重量的92％，製得中藥組合物顆粒劑。
- 實施例5
取西洋參、三七、石斛、丹參粗藥材，揀選除去其中夾雜的雜質，乾燥得淨藥材。取揀選後的淨藥材，分別超微粉碎成粒度為D90＝45微米的破壁粉體。按照重量份計，取西洋參破壁粉體15份、三七破壁粉體3份、石斛破壁粉體6份、丹參破壁粉體10份，混勻，採用輻照劑量為8千戈瑞的Co60輻照法滅菌後，分別用濃度為30vol％的含水乙醇製成軟材，經20目篩的制粒機制粒後，在80℃下烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為60目的占中藥顆粒劑總重量的98％，製得中藥組合物顆粒劑。
- 實施例6
取西洋參、三七、石斛、丹參粗藥材，揀選除去其中夾雜的雜質，乾燥得淨藥材。取揀選後的淨藥材，分別超微粉碎成粒度為D90＝30微米的破壁粉體。按照重量份計，取西洋參破壁粉體3份、三七破壁粉體5份、石斛破壁粉體30份、丹參破壁粉體32份，混勻，採用輻照劑量為8千戈瑞的Co60輻照法滅菌後，分別用濃度為30vol％的含水乙醇製成軟材，經10目篩的制粒機制粒後，在80℃下烘乾，得到未篩分的中藥顆粒劑；將未篩分的中藥顆粒劑採用整粒機整粒，使得顆粒中粒度為20目的占中藥顆粒劑總重量的90％，將各中藥顆粒混。
實驗例1
該實驗例用於檢測中藥組合物顆粒劑中的有效成分。對採用該發明實施例4製備的中藥組合物顆粒劑進行薄層色譜鑑別，並測定其中人參皂苷Rg1、Rb1和丹參酮IIA的含量。
（1）西洋參和三七的薄層色譜鑑別
取該品3g，研細，加甲醇30毫升，超聲提取30分鐘，濾過，濾液加於中性氧化鋁柱（100-200目，10g，內徑2厘米）上，用體積分數為40％的甲醇溶液50毫升洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加30毫升水使溶解，用適量水飽和的正丁醇溶液振搖萃取3次，合併萃取液，加濃度為0.5％的氫氧化鈉溶液25毫升洗滌，棄去洗液，將正丁醇液水洗至中性，蒸乾，殘渣加甲醇1毫升使溶解，作為供試品液。另取西洋參、三七對照品，同法製成對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VIB）試驗，吸收上述溶液各2微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為4:2:5的正丁醇-乙酸乙酯-水放置後的上層溶液作為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以體積分數為1％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與三七、西洋參對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
（2）丹參的薄層色譜鑑別
取該品3克，研細，稱取粉末4克，加乙醚20毫升，振搖，放置1小時，濾過，濾液揮乾，殘渣加乙酸乙酯1毫升使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照品1克，同法製成對照品溶液。再取丹參酮IIA對照品，加乙酸乙酯製成每1毫升含2毫克丹參酮IIA的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（國藥典2005年版一部附錄VIB）試驗，取上述三種溶液各5ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為19:1的苯-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的暗紅色斑點。
（3）人參皂苷Rg1和Rb1的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以體積比為19:81的乙腈-水為流動相，檢測波長為203納米，理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低於6000。
對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品，加甲醇製成每1毫升中分別含0.5毫克人參皂苷Rg1、0.5毫克人參皂苷Rb1的混合溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備取該品4克，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇溶液50毫升，稱定重量，置水浴中加熱回流提取1.5小時，放冷，再稱定重量，用水飽和正丁醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25毫升，置蒸發皿中，蒸乾，殘渣加50％甲醇適量使溶解，並轉移至10毫升量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VID）測定。分別精密吸取對照品溶液10微升與供試品溶液10微升，注入液相色譜儀，測得含人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的總含量為2.6wt％。
（4）丹參酮IIA的含量測定
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以體積比為75:25的甲烷-水為流動相，檢測波長為270納米，理論板數按丹參酮IIA峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備精密稱取丹參酮IIA對照品10毫克，置50毫升棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取2毫升，置25毫升棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的製備取該品0.3克，研細，過三號篩，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50毫升，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VID）測定。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5微升，注入液相色譜儀，測得該品中丹參酮IIA的含量為0.09wt％。
實驗例2
該實驗例用於評價《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》中藥組合物顆粒劑的對肝損傷的保護作用。
（1）試驗藥物a）實施例1中製備的中藥組合物顆粒劑，製成濃度為1克/毫升的濃縮液；b）中藥飲片：採用常規方法製備而成，重量組分為：西洋參12份、三七12份、石斛6份、丹參12份，通過煎煮製成濃度為1克/毫升濃縮液；c）陽性對照藥物：甘草酸二銨膠囊，商品名：甘利欣；d）高麗參：通過煎煮、濃縮至1克/毫升的浸膏，臨用前用蒸餾水稀釋至所需濃度。
（2）試驗動物SPF級雄性昆明小鼠，雌雄均有，體重18-22克；清潔級雄性SD大鼠，體重180-220克。
（3）給藥劑量中藥組合物顆粒劑採用實施例1所製備而得的組合物，給藥劑量為：
對小鼠低、中、高3個劑量分別為0.46、0.91、1.82克/千克體重；對大鼠低、中、高3個劑量分別為0.32、0.63、1.26克/千克體重。中藥飲片的小鼠劑量為0.91克/千克；大鼠劑量為0.63克/千克體重。陽性對照藥物的給藥劑量為：甘利欣小鼠給藥劑量為58.5毫克/千克體重；高麗參小鼠給藥劑量為1.00克/千克體重；血栓通膠囊大鼠給藥劑量為0.82克/千克體重。
（4）試驗方法與結果
將小鼠70隻，隨機分成7組，每組10隻，分別為：對照組（蒸餾水），顆粒劑低（0.46克/千克）、中（0.91克/千克體重）、高劑量組（1.82克/千克體重），飲片組（0.91克/千克體重），甘利欣組（58.5毫克/千克體重）。
各組小鼠分別灌胃給予相應劑量藥物或蒸餾水，每天1次，連續7天，試驗末次給藥1小時，除正常對照組外，其餘各組小鼠腹腔注射0.2％四氯化碳花生油溶液10毫升/千克體重，於試驗前禁食12小時，於腹腔注射0.2％四氯化碳花生油溶液24小時後所有小鼠眼底靜脈叢取血，分離血清檢測ALT（谷丙轉氨酶）和AST（穀草轉氨酶）的含量，然後處死動物，剖取肝臟，用10％福馬林液固定，石蠟包埋切片，HE染色，做病理檢查。測試出不同組別小鼠血清中ALT和AST的含量，結果見表1。
表1對CCl4所致急性肝損傷小鼠血清中ALT、AST的影響（x±s） | ||||
組別 | 劑量（/千克體重） | 動物數 | ALT(U/L) | AST（U/L） |
正常對照 | — | 10 | 41.3±9.4 | 198.1±50.9 |
模型對照組 | — | 10 | 747.2±195.4# | 1121.6±330.5# |
甘利欣組 | 58.5毫克 | 10 | 497.8±251.0* | 718.7±249.7** |
飲片組 | 0.91克 | 10 | 627.5±242.0 | 939.0±257.6 |
顆粒劑低 | 0.46克 | 10 | 756.5±435.1 | 989.9±372.3 |
顆粒劑中 | 0.91克 | 10 | 591.9±208.4 | 856.6±215.5* |
顆粒劑高 | 1.82克 | 10 | 533.4±187.5* | 753.68±286.6* |
註：與正常對照組比較，#P＜0.05；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01從表1中的結果可知，與正常對照組比較，模型對照組血清中ALT和AST含量均顯著升高（P＜0.01），病理學檢查見明顯炎症、壞死，表明肝損傷模型較成功。顆粒劑低、中、高劑量組和飲片組以及陽性對照藥甘利欣組均能降低血清中ALT和AST含量，並且減輕肝臟的病理學損傷，其中顆粒劑中、高劑量組和陽性對照藥甘利欣組能顯著降低血清中ALT和AST含量（與模型組比P＜0.05或P＜0.01）。這些結果顯示了該中藥組合物顆粒劑的護肝作用，同時，將同等給藥劑量顆粒劑和飲片的效果進行比較，可以看出顆粒劑對ALT和AST含量的降低效果優於飲片，因此將該中藥組合物顆粒劑的加工成破壁粉比飲片的護肝效果更佳。
各劑量組和對照組對CCl4所致小鼠急性肝損傷病理變化的影響結果見表2。從表2可以看出，正常對照組小鼠肝細胞基本正常，偶可見有胞漿疏鬆、水腫或血管周圍少許炎性細胞浸潤現象；模型組肝細胞索排列見紊亂，肝組織呈現不同程度的病理改變，大量炎症細胞浸潤；顆粒劑低、中、高劑量組以及飲片組、陽性藥組可見肝組織水腫、壞死明顯減輕，炎症程度也明顯減輕。按照肝臟損傷嚴重程度逐減的順序排隊依次為：模型組、顆粒劑低劑量組、飲片組、顆粒劑中劑量組、顆粒劑高劑量組、甘利欣組、正常對照組。
表2對CCl4所致小鼠急性肝損傷病理變化的影響 | |||||||||||||||
組別 | 炎性細胞浸潤 | 脂肪變性 | 細胞水腫、變性、壞死、壞死灶 | ||||||||||||
— | + | ++ | +++ | ++++ | — | + | ++ | +++ | ++++ | — | + | ++ | +++ | ++++ | |
正常對照 | 8 | 1 | 1 | 0 | 0 | 9 | 1 | 0 | 0 | 0 | 8 | 2 | 0 | 0 | 0 |
模型對照組 | 0 | 1 | 4 | 5 | 0 | 7 | 2 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 4 | 5 | 1 |
甘利欣組 | 4 | 5 | 1 | 0 | 0 | 8 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 7 | 2 | 1 | 0 |
飲片組 | 0 | 7 | 2 | 1 | 0 | 8 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 | 3 | 1 | 0 |
顆粒劑低 | 0 | 8 | 2 | 0 | 0 | 8 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 4 | 5 | 1 | 0 |
顆粒劑中 | 0 | 6 | 4 | 0 | 0 | 8 | 2 | 0 | 0 | 0 | 1 | 7 | 2 | 1 | 0 |
顆粒劑高 | 1 | 8 | 1 | 0 | 0 | 9 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 8 | 2 | 0 | 0 |
註：+個別；++多處；+++廣泛；++++連成大片。
由此表明，該中藥組合物顆粒劑能明顯防止或減輕肝組織損傷，具有較好的保肝作用，尤以高劑量組更為顯著。同時，將同等給藥劑量的顆粒劑和飲片的效果進行比較，可以看出顆粒劑對肝臟的保護作用更好，因此由破壁粉體制粒而成的該發明所提供的中藥組合物顆粒劑比傳統飲片的護肝效果更佳。
實驗例3
該實驗例用於評價該發明中藥組合物顆粒劑的對心腦血管的保護作用。
受試藥物：顆粒劑各組採用實施例4所得產品，其他藥品同實驗例2。
（1）對小鼠血清溶血素水平的影響
昆明種小鼠72隻，體重18-22g，雌雄各半，隨機分為6組，每組12隻，分別為：對照組（蒸餾水），顆粒劑低（0.46克/千克體重）、中（0.91克/千克體重）、高劑量組（1.82克/千克體重），飲片組（0.91克/千克體重），陽性對照藥高麗參組（1.0克/千克體重）。試驗藥品同實施例8。
各組小鼠分別灌胃給予相應劑量藥物或蒸餾水，每天1次，連續14天，末次給藥24小時後，按血凝法測定血清溶血素。該方法的基本原理是經綿羊紅細胞（SRBC）免疫動物的淋巴細胞可產生抗SRBC抗體（溶血素），並釋放至外周血。這種方法在試管內與SRBC溫育，在補體參與下可產生溶血反應，免疫動物血清中溶血素的含量可以通過溶血過程中釋放的血紅蛋白來測出。得到的小鼠血清半數溶血值HC50結果見表3。
表3對小鼠血清溶血素水平的影響（x±s） | |||
組別 | 劑量（/千克體重） | 動物數 | 血清HC50 |
對照組 | -- | 10 | 61.52±16.75 |
高麗參組 | 1.0克 | 12 | 86.57±19.82** |
飲片組 | 0.91克 | 11 | 76.88±22.73 |
顆粒劑低 | 0.46克 | 11 | 68.86±22.55 |
顆粒劑中 | 0.91克 | 10 | 81.6±21.69* |
顆粒劑高 | 1.82克 | 10 | 84.71±17.17** |
與對照組比較，*p＜0.05
（2）對血瘀模型大鼠血液流變性的影響
表3中的結果表明，與對照組比較，顆粒劑低、中、高劑量組，飲片組和陽性對照藥甘利欣組均有提高小鼠血清溶血素水平的作用（與對照組比P＜0.05或P＜0.01），其中，顆粒劑中、高劑量組的作用更加顯著。將同等給藥劑量顆粒劑和2的效果進行比較，顆粒劑提高小鼠血清溶血素水平的作用更好，因此將該中藥組合物顆粒劑的加工成破壁粉比傳統飲片的效果更佳。
清潔級SD大鼠60隻，雌雄各半，隨機分為6組，分別為：對照組（蒸餾水），顆粒劑低（0.32克/千克體重）、中（0.63克/千克體重）、高劑量組（1.26克/千克體重），飲片組（0.63克/千克體重），陽性對照藥血栓通組（0.82克/千克體重）。各組小鼠分別灌胃給予相應劑量藥物或蒸餾水，每天1次，連續7天。於末次給藥後1小時，皮下注射鹽酸腎上腺素0.08毫升/100g1次，並結合浸冰水。處置後停食，10小時後抽血，用血液流變儀檢測血液流變各項指標：全血粘度（ηb）取全血低切粘度（LBD，1s）、中切粘度（MBD，20s）、高切粘度（HBD，200s）值和血漿粘度（ηp），檢測結果見表4。
表4對血瘀症大鼠血液流變學指標的影響（x±s） | ||||||
組別 | 動物數 | 劑量（/千克體重） | ηb/mpa·s | |||
LBD/1s | MBD/20s | HDB/200s | ηb/mpa·s | |||
對照組 | 10 | -- | 14.27±1.86 | 5.78±0.77 | 4.64±0.45 | 1.29±0.13 |
血栓通組 | 9 | 0.82克 | 12.59±0.97* | 5.35±0.58 | 4.09±0.58* | 1.18±0.08* |
飲片組 | 10 | 0.63克 | 12.77±0.87* | 5.20±0.57 | 4.30±0.52 | 1.21±0.07 |
顆粒劑低 | 10 | 0.32克 | 13.39±1.72 | 5.60±0.61 | 4.25±0.75 | 1.17±0.13* |
顆粒劑中 | 9 | 0.63克 | 12.38±1.55* | 5.56±0.69 | 4.01±0.49* | 1.13±0.16* |
顆粒劑高 | 10 | 1.26克 | 12.05±1.35** | 4.94±0.78* | 3.97±0.52** | 1.14±0.36* |
註：與對照組比較，*為P＜0.05，**為P＜0.01
由表4可見，與對照組比較，顆粒劑低、中、高劑量組、飲片組以及陽性對照血栓通組均有降低全血LBD、MBD、HBD和ηp的作用，其中顆粒劑中、高劑量組和陽性對照血栓通組效果較明顯（P＜0.05或P＜0.01）。將同等給藥劑量顆粒劑和2的效果進行比較，顆粒劑降低全血LBD、HBD和ηp的作用更好，因此該發明所提供的由破壁粉體制粒而成的中藥組合物顆粒劑比傳統飲片的效果更佳。
以上結果表明，中藥顆粒劑和飲片能抑制血清AST和ALT的升高，改善肝臟的病理學損傷；升高血清溶血素值；降低血漿粘度和全血低、中、高切粘度，從而改善血液流變學的狀態。因此，該發明的中藥組合物顆粒劑具有明顯的保肝、改善免疫、以及改善血液流變學狀態的功效。
實驗例4
該實驗例用於評價該發明中藥組合物顆粒劑的安全性。
取SPF級昆明小鼠30隻，雌雄各半，體重18-22克，隨機分成3組，分別為：對照組、顆粒劑組、飲片組。各組動物均空腹12小時，分別以允許的最大給藥量灌胃給藥。對照組給予蒸餾水0.4毫升/10克體重；顆粒劑組採用實施例3所得產品，給予1克生藥/毫升濃度的原藥液（為最大濃度）0.4毫升/10克體重，連續3次，每次間隔4小時；飲片組藥物配比及煎煮方法同實驗例2，單次給予3克生藥/毫升濃度的原藥液（為最大濃度）0.4毫升/10克體重。給藥後對動物體重、精神狀態、毛髮、自主活動、攝食量、糞便、口鼻分泌物等一般狀況進行觀察，並記錄動物的不良反應和死亡情況，連續觀察7天。
結果表明，與對照組比較，顆粒劑和飲片組動物灌胃給藥後，大部分動物均出現活動減少，神情倦怠，除此以外，未見其它明顯異常反應；2小時後，動物基本恢復正常，與對照組比較，無明顯異常。在2小時後的觀察期間，動物的精神狀態良好、毛色光潔、活動自如、呼吸均勻、攝食量、糞便未見明顯異常、口鼻內無異常分泌物，無動物死亡。在給藥前、給藥後第3天、給藥後第5天和給藥後第7天，分別對動物進行稱重，動物體重變化情況見表5。結果顯示，各時間點動物體重均無明顯組間差異。
表5顆粒劑和飲片對小鼠急性毒性反應的觀察結果 | |||||||
組別 | 劑量 （克生藥/千克體重） | 動物數 | 死亡數 | 給藥前體重（克） | 給藥後3天體重（克） | 給藥後5天體重（克） | 給藥後7天體重（克） |
對照組 | 0 | 10 | 0 | 19.6±1.4 | 23.8±2.2 | 25.9±2.9 | 28.2±3.2 |
顆粒劑 | 120 | 10 | 0 | 19.8±1.2 | 23.6±0.7 | 26.1±1.1 | 27.3±2.0 |
飲片組 | 120 | 10 | 0 | 19.4±1.0 | 23.5±1.4 | 25.9±0.8 | 27.4±1.0 |
註：組間比較無顯著性差異。
試驗結束，解剖小鼠，肉眼觀察主要臟器顏色及形態學有無改變，未觀察到明顯改變。小鼠灌胃顆粒劑和飲片的一日最大給藥量為120克生藥/千克體重（相當於臨床用藥的121025.6倍），未見明顯毒性。
實驗例5
臨床觀察總結
以實施例1、3、4中製備而得的中藥顆粒劑為對象，對該品的藥效進行臨床檢驗。
臨床觀察100例，其中男48例、女52例，年齡40-80歲。服用該發明的藥物後，有效率達90％以上。
典型病例：
1、張某，女，53歲，因胸悶痛就診，症見心悸不寧，氣短乏力，心煩少寐，自汗盜汗，口乾耳鳴，腰膝酸軟，眠欠佳，舌紅，苔少，脈細數。此為氣陰兩虛，瘀阻脈絡證，治宜益氣滋陰，行氣活血，化瘀通絡。採用該發明實施例1中的中藥組合物治療，患者諸症明顯好轉。
2、劉某，女，68歲，因眩暈就診，患者眩暈，動則加劇，遇勞則發，頭痛如刺，神疲懶言，乏力自汗，心悸少寐，健忘，舌質淡暗，有瘀點，苔薄白，脈細弦。此為氣陰兩虛，瘀阻脈絡證，治宜益氣滋陰，行氣活血，化瘀通絡，養心健脾。採用該發明實施例3中的中藥組合物治療，患者諸症明顯好轉。
3、徐某，男，80歲，因呆滯善忘就診，症見倦怠嗜臥，神思恍惚，少氣懶言，心悸失眠，多夢易驚，神疲乏力，面唇無華，納呆食少，舌淡暗，邊有齒痕，苔薄白，脈細弱。此為氣陰兩虛，瘀阻脈絡證，治宜益氣滋陰，行氣活血，化瘀通絡，益腦，養心健脾。採用該發明實施例4中的中藥組合物治療，患者諸症明顯好轉。
榮譽稱號
2017年12月11日，《中藥組合物顆粒劑及其製備方法》獲得第十九屆中國專利優秀獎。
