《miR-223對實驗性自身免疫腦脊髓炎的調節作用機制研究》是依託天津醫科大學，由李岩擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miR-223對實驗性自身免疫腦脊髓炎的調節作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李岩
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
miR-223主要在骨髓細胞表達，調控粒細胞的分化，在癌症和病毒感染中發揮作用。最近，研究發現miR-223在風濕性關節炎和急性白血病人T細胞中高表達，具有預防和治療相關疾病的作用。但對T細胞介導的多發性硬化症及其動物模型自身免疫性腦脊髓炎（EAE）的調節作用尚不清楚。我們研究發現EAE小鼠脾臟和脊髓中miR-223表達顯著升高，並且干擾抑制miR-223後，可顯著延緩發病時間並降低疾病臨床評分。因此，我們認為miR-223可促進EAE發生髮展。本項目擬通過超表達及抑制miR-223表達的穩定細胞系和疾病動物模型，在體內小鼠EAE疾病模型和體外T細胞定向分化中，研究miR-223對實驗性自身免疫性腦脊髓炎及其相關輔助T細胞分化的調節作用和分子機制。在整體、細胞和分子水平揭示miR-223調節EAE的作用機理，為人類多發性硬化症以及miR-223相關的自身免疫和炎症性疾病的預防和治療奠定
結題摘要
miR-223主要在骨髓細胞表達，調控粒細胞的分化，在癌症和病毒感染中發揮作用。最近，研究發現miR-223在自身免疫關節炎和急性白血病人T細胞中高表達，對有效預防和治療相關疾病有一定作用。但對T細胞介導的自身免疫性腦髓炎（EAE）的調節作用未見報導。本項目研究發現EAE小鼠脾臟/脊髓中miR-223表達顯著升高，並且干擾抑制miR-223後，可顯著降低發病率和臨床評分。本項目證明miR-223對小鼠EAE病例發生髮展具有調節作用，闡明miR-223對T細胞分化和EAE發生的分子機制，探索以miR-223為靶點的自身免疫疾病治療新途徑。 主要研究結果如下： 1.敲低miR-223對小鼠EAE發生具有保護作用。我們構建敲低miR-223的慢病毒，MOG抗原誘導小鼠EAE模型，發現注射miR-223慢病毒組小鼠發病明顯減緩，臨床評分降低，脊髓脫髓鞘和炎性細胞浸潤程度顯著低於對照組。說明敲低miR-223對小鼠EAE發生、脊髓脫髓鞘和中樞神經系統炎症反應具有保護作用。 2.敲低miR-223對EAE小鼠體內不同T細胞亞群分化具有重要調節作用。流式細胞術檢測小鼠脾臟、淋巴結、中樞神經系統，敲低miR-223顯著降低脾臟中Th1和Th17細胞轉錄因子和相關細胞因子T-bet、IFN-γ、IL-17A等表達；實施定量檢測脾臟中這些因子表達，同樣發現敲低miR-223降低IL-17A和IFN-γ基因mRNA表達水平。 3.敲低miR-223抑制Th1和Th17細胞體外分化。體外分離小鼠脾臟初始T細胞，誘導分化為Th1和Th17細胞，進一步驗證抑制miR-223可以顯著抑制Th17細胞的分化，降低T-bet表達，降低致病性Th17細胞分化。但是病理反應機制、具體靶點不清楚，本項目隨後就miR-223的具體靶點和機制進行詳細研究。 4.確定miR-223靶基因。通過螢光素酶報告基因分析、實時定量和WB蛋白分析，確定Hsp72為miR-223的靶基因。 5.尋找miR-223下游起作用基因。再次驗證，抑制miR-223後，EAE小鼠的CNS系統中Stat3蛋白磷酸化水平顯著降低，限制Th17細胞分化。 因此，我們認為miR-223可促進EAE發生髮展。本項目在整體、細胞和分子水平揭示miR-223調節EAE的作用和細胞及分子機制，為與miR-223相關的自身免疫疾病的預防和治療奠定基礎
