《GSN在MS/EAE發病過程中的作用機制研究》是依託山東大學，由劉師蓮擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：GSN在MS/EAE發病過程中的作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉師蓮
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
近年來，關於凝溶膠蛋白（GSN）和維生素D結合蛋白（DBP）在多發性硬化（MS）中的作用倍受關注。我們的前期研究表明GSN含量水平與MS呈顯著相關性，並提示其活性與MS亦有密切聯繫。同時，由於在其他炎性疾病中已發現GSN可與多種蛋白和生物活性小分子相互作用，其中涉及防止炎性損傷、免疫調控等多種生物過程，這表明GSN在MS/EAE過程中亦可能存在多種相互作用網路通路。本課題基於前期的相關發現，擬以人類體液、動物模型組織樣本、原代神經元細胞為研究對象，首次從EASS、免疫調控、細胞抗凋亡能力等多個角度探討GSN含量及活性變化在MS中的作用及相關機制；並通過蛋白質相互作用組學技術和小分子化合物質譜鑑定技術，尋找與GSN相互作用的其他未知分子，擴展其生物網路通路。這對發掘具有潛在臨床診斷和治療功能的候選蛋白，尋找治療MS的有效藥物靶標具有重要意義。
結題摘要
多發性硬化(MS)症是一種發病原因不明的中樞神經系統(CNS)自身免疫性、炎性、脫髓鞘疾病。近年，關於凝溶膠蛋白(GSN)和維生素 D(VD)在MS中的作用倍受關注。本課題組的前期研究表明 GSN 和VD水平與 MS 呈顯著相關性。據此，本項目利用人類體液、動物模型—實驗性變態反應性腦脊髓炎(EAE)組織樣本、神經元細胞常用細胞株PC12為研究對象，深入研究了GSN和VD在MS/EAE中的作用機制。首先利用western blot技術再次驗證MS病人的腦脊液和血液中GSN表達量較患有其他神經系統疾病(OND)病人有顯著降低，其與前期2-D DIGE結果一致。隨後，成功誘導了Lewis大鼠的EAE模型，H&E染色結果表明炎症浸潤在EAE大鼠脊髓中比較明顯。通過對EAE大鼠補充VD發現：補充VD的EAE大鼠發病時間明顯推遲，炎性損傷減少，但作用有限。進一步研究發現，VD可使EAE大鼠血清和脊髓中鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和GSN的含量下調，而VD 對GSN的下調可能削弱了VD在MS/EAE中的治療作用。我們又首次利用對EAE大鼠同時補充VD與芬戈莫德(FTY720)的方法發現，VD在EAE中的治療作用可能是通過下調EAE體內S1P的含量實現的，進一步的機制研究表明VD可通過結合其體內的維生素D受體(VDR)下調S1P的合成酶--鞘氨醇激酶1(SPHK1)的含量來下調S1P的含量。首次通過升高EAE體內GSN含量方法，證實GSN在EAE發病過程中的保護性作用，首次發現補充VD的同時提高EAE體內GSN的含量可增強VD在EAE中的預防和治療作用。機制研究結果表明，VD可通過結合VDR下調GSN的含量。功能驗證實驗證實，胞質型凝溶膠蛋白(cGSN)在神經元凋亡過程中起保護作用：轉染GSN的小干擾RNA(siGSN)組，細胞凋亡率明顯高於轉染對照siRNA(NC)組。本課題組還利用iTRAQ質譜技術，從EAE發病前後和補充VD前後的大鼠脊髓和血清樣本中發現了數十種差異表達蛋白，為後續研究VD對EAE的預防和治療機制提供靶標候選蛋白。由此我們得出結論：GSN和VD均在EAE的發病過程中起保護性作用，在補充VD的同時，增加機體內GSN含量，可以增強VD對EAE/MS的預防和治療效果。這對臨床套用GSN和VD預防和治療MS提供了新的思路和理論實驗依據。本項目的實施基本按照基金項目內容
