《MicroRNA-378在胃癌浸潤轉移中的作用及其機制研究》是依託復旦大學，由師英強擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MicroRNA-378在胃癌浸潤轉移中的作用及其機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：師英強
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
胃癌是我國常見惡性腫瘤之一，儘管目前臨床上對胃癌的診斷和治療取得了很大的進展，但對淋巴結廣泛轉移的胃癌仍缺乏有效手段。目前有關胃癌淋巴結轉移的分子生物學機制還不十分清楚，近些年研究證實microRNA在胃癌的發生髮展及轉移中起著重要作用。我們前期工作發現miR-378在胃癌中顯著低表達，與胃癌浸潤深度和淋巴結轉移呈負相關，分期越高，表達越低；體外細胞功能實驗初步表明miR-378具有抑制胃癌細胞遷移和侵襲能力，而與細胞增殖無關。據此，我們提出假說：miR-378可能作為胃癌轉移抑制基因在胃癌進展過程中發揮著重要作用，為驗證這一假設，我們將從分子、細胞、組織以及動物整體水平等多方面探討miR-378在胃癌侵襲轉移中的重要作用，明確miR-378對其靶基因調控的作用機制，本研究將從miR-378這個新視點為揭示胃癌淋巴結轉移的發生機制奠定基礎，為胃癌及其淋巴結轉移的防治提供新的思路。
結題摘要
在前期研究結果基礎上，我們將研究重心由miRNA轉到環狀RNA上。隨著RNA高通量測序的迅速發展，非編碼RNA（non-coding RNAs，ncRNAs）與腫瘤的關係越來越收到人們的重視。在這些非編碼RNA的中，有一類特殊的非編碼RNA—環狀RNA (Circular RNA, circRNA)已逐漸成為目前非編碼RNA的研究熱點。但到目前為止，人們對胃癌中環狀RNA的認識甚少，它們在胃癌中的表達、功能及調控機制也都有待研究。本研究通過提取3對胃癌組織和相應癌旁組織總RNA，去除核糖體RNA，構建鏈特異性RNA測序文庫，採用高通量RNA測序，結合生物信息分析，鑑定並篩選出180個在胃癌組織中差異表達的環狀RNA。其中，有一個環狀RNA circPVT1在胃癌組織顯著高表達。而後在研究circPVT1在特徵上，我們通過設計引物擴增環狀RNA circPVT1的前後交接位點，並Sanger測序證實其為環狀結構；通過分離細胞核和細胞質RNA，real time PCR方法檢測circPVT1在細胞中的分布情況以及採用RNA FISH方法檢測其在細胞中的定位，結果發現circPVT1大部分分布在細胞質中；通過放線菌素D處理細胞抑制RNA轉錄，不同時間收集細胞RNA，real time PCR方法檢測circPVT1的穩定性情況發現，circPVT1能夠穩定存在。我們進一步在大樣本量的胃癌組織中驗證了circPVT1在胃癌中顯著上調。通過收集臨床資料，我們進一步分析circPVT1在胃癌中的表達與臨床資料及預後關係後發現，circPVT1與TNM分期和神經侵犯相關，並是影響胃癌患者預後獨立的影響因子。在功能上，通過設計特異siRNA, 在體外干擾circPVT1的表達，發現干擾掉circPVT1後能顯著抑制胃癌細胞的增殖。在作用機制上，我們通過採用生物信息學預測的方法預測與circPVT1相互結合的microRNA分子，並用雙螢光素酶報告系統進行驗證後發現，miR-125家族可能與circ-PVT1相結合，進而抑制miR-125的抑癌活性，從而使circPVT1發揮促癌的作用。本研究結果表明，環狀RNA可以作為一類具有潛在生物學功能並具有臨床指導價值的新型的非編碼RNA。這也許能為研究胃癌的發病機制提供新的理論依據，同時也為胃癌的治療及提供新的策略。
