《microRNA在白血病DNMT抑制劑耐藥中的作用及機制研究》是依託江蘇大學，由錢軍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA在白血病DNMT抑制劑耐藥中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：錢軍
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
DNA甲基轉移酶（DNMT）抑制劑在治療急性髓系白血病（AML）過程中會發生耐藥，明確該類藥物的耐藥機制對於提高其療效具有重要意義。我們前期研究建立DNMT抑制劑5-氮雜-2′-脫氧胞苷（DAC）耐藥的K562白血病株，發現癌性miRNA（let-7a-3和miR-378）發生去甲基化而表達上調，且miR-378能夠促進腫瘤形成、增強對阿糖胞苷等的耐藥性。本研究擬套用miRNA表達譜和基因表達譜篩選出在DAC耐藥株差異表達的miRNA分子和相關基因，通過表達調控進一步明確在DNMT耐藥中發揮作用的miRNA；結合靶基因預測及表達調控篩選鑑定該miRNA分子的靶基因，探討miRNA參與DNMT抑制劑耐藥的機制；分析所選miRNA分子在成人AML原代細胞中的表達、甲基化及其臨床意義；從而探索套用miRNA分子靶向干預逆轉DAC耐藥的可行性，為AML的生物治療提供新靶點。
結題摘要
DNA甲基轉移酶（DNMT）抑制劑在治療急性髓系白血病（AML）過程中會發生耐藥，明確該類藥物的耐藥機制對於提高其療效具有重要意義。我們建立DNMT抑制劑5-氮雜-2´-脫氧胞苷（DAC）耐藥的K562白血病株（K562/DAC），發現K562/DAC細胞中癌性microRNA（miR-378、miR-125等）及癌基因（DDX43、ID1和ID2等）表達上調，而抑癌性miR-186、miR-29b/c等表達下調； AML臨床標本發現AML患者中miR-186、miR-215、miR-218、miR-34c、miR-29b/c表達下調，其低表達患者的總生存期均顯著縮短，預示著AML患者不良預後。H19、miR-378和miR-125b在AML中表達上調；H19高表達患者的生存期降低；miR-378高表達患者的無復發生存時間縮短等。DDX43、ID1和ID2表達上調，高表達患者的生存期降低；同時，我們還發現AML患者中H19與ID2表達呈正相關。 體外實驗揭示miR-186過表達可使白血病細胞生存降低、凋亡增加；DDX43過表達促進白血病細胞腫瘤球和克隆形成、促進增殖和生存、抑制凋亡、增加對DAC的耐藥性，小鼠體內實驗揭示DDX43促進白血病形成；通過螢光素酶實驗證實miR-186可直接調控DDX43表達。進一步發現K562/DAC中非編碼RNA H19啟動子發生去甲基化改變而過表達，而DDX43過表達可使K562細胞中H19發生啟動子去甲基化、表達水平明顯上調；H19干擾可抑制DAC耐藥株細胞增殖、生存能力下降。結果提示：miR-186表達下調、靶基因DDX43表達上調、進而誘導H19啟動子去甲基化改變而表達增加，導致ID2表達上調，參與DAC耐藥。 此外，我們還發現miR-378過表達可促進白血病細胞增殖、集落形成和幹細胞克隆球形成增加、抑制細胞凋亡等，其機制可能與下調靶蛋白FUS增加轉染細胞幹細胞特性，從而促白血病細胞生長有關。在DAC作用下K562細胞miR-29b/c啟動子發生去甲基化改變、表達明顯上調，ID1啟動子的未甲基化態勢並未發生改變、ID1表達水平顯著下調；而K562/DAC中miR-29b/c啟動子區發生去甲基化改變，但其表達水平並未上調，ID1表達卻明顯上調；提示miR-29b/c誘導的ID1非甲基化依賴的表達異常可能參與DAC耐藥。
