《微小RNA-301a(miR-301a)在胃癌中的生物學功能及其調控機制的研究》是依託上海交通大學，由顧琴龍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：微小RNA-301a(miR-301a)在胃癌中的生物學功能及其調控機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：顧琴龍
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
胃癌發病率高，預後差，發生髮展機制不清。微小RNA(microRNA, miRNA)與人類癌症的發生髮展有著密切的聯繫，在諸多惡性腫瘤中都發現有miRNA表達異常。本課題組前期研究表明miR-301a在胃癌中呈高表達，且與胃癌的發生髮展密切相關，但其作用及其調控機制還不清楚。本研究擬採用通過上調或下調miR-301a在胃癌細胞中的表達，觀察其對細胞生物學行為的作用，研究其在胃癌發生髮展中的調控機制。通過預測miR-301a的可能靶基因，再通過蛋白水平和構建螢光素酶報告基因載體進行驗證，進一步分析其在胃癌中的作用通路。進一步由EMSA和CHIP技術尋找調控miR-301a異常表達的轉錄因子。本項目不僅有助於闡明miR-301a作用於腫瘤的分子機理，也為臨床採用針對miR-301a的靶向調節治療提供新的思路。
結題摘要
目的：我們通過微陣列技術篩選出一系列胃癌與正常對照差異表達的miRNA，而miR-301a是其中差異最顯著的之一。本課題主要目的在於探討miR-301a在胃癌組織中的表達和功能，並探索其調控機制。材料與方法：（1）套用qRT-PCR對前期microRNA微陣列篩選出的miR-301a在九株胃癌細胞株與永生化胃黏膜細胞GES-1和正常胃黏膜組織中的表達水平進行驗證，檢測其在51對配對的胃癌腫瘤組織與癌旁組織中的表達水平，並進一步分析胃癌組織中miR-301a表達水平與胃癌臨床病理特徵之間的關係；（2）採用miR-301a mimics與miR-301a逆轉錄病毒表達載體上調胃癌細胞株SGC-7901 中miR-301a的表達水平，以及miR-301a inhibitors下調該細胞株miR-301a的表達水平，觀察其對胃癌細胞生物學行為的影響；（3）生物信息學預測靶基因，然後結合3’UTR 雙螢光素酶報告系統檢測, qRT-PCR和免疫印跡的方法，篩選並驗證miR-301a作用的靶基因，初步明確miR-301a的發揮生物學功能的分子機制。結果：qRT-PCR檢測結果顯示，miR-301a在胃癌細胞株中的表達水平明顯高於其在GES-1和正常胃黏膜組織中的表達水平，與microRNA微陣列中的檢測結果趨勢相一致。miR-301a在51例胃癌組織中的平均表達水平顯著高於其配對癌旁組織，且胃癌組織miR-301a表達水平越高者，腫瘤組織分化程度越差。上調miR-301a表達水平能有效增強胃癌細胞株SGC-7901體外增殖、克隆形成、遷移侵襲及體內成瘤能力，抑制凋亡，下調miR-301a除了逆轉上述生物學行為，還誘導細胞周期發生G2/M期阻滯。生物信息學分析提示轉錄因子RUNX3的mRNA的3’UTR含有miR-301a直接作用的種子序列，雙螢光素酶報告系統檢測進一步證實了該靶序列，qRT-PCR及Immunoblot證實miR-301a對RUNX3蛋白表達的調控發生在轉錄後水平。結論：miR-301a在胃癌細胞和組織中處於高表達狀態，其表達水平與腫瘤組織分化負相關；上調miR-301a表達水平能增強胃癌細胞的惡性表型，反之亦然；miR-301a通過對其靶基因RUNX3的調控參與了胃癌的發生髮展過程。
