《miRNA423-5p調控三葉因子表達及在胃腸道黏膜修復中的作用機制》是依託廈門大學，由任建林擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA423-5p調控三葉因子表達及在胃腸道黏膜修復中的作用機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：任建林
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
三葉因子參與胃腸道黏膜保護及相關病變，其表達與調控具重要意義。我們前期研究明確三葉因子對細胞生物學行為的影響，探討信號通路，篩選鑑定結合蛋白，檢測表達規律。預實驗中qRT-PCR檢測發現miRNA423-5p與TFF1表達負相關，miRNA423-5p模擬物轉染正常胃黏膜細胞GES-1後下調TFF1表達，並促進細胞增殖與集落形成而抑制細胞遷移。本課題擬探討miRNA423-5p調控三葉因子表達及在其介導下參與黏膜修復的作用及機制，並進一步開展如下研究：1、miRNA423-5p調控TFF1表達及作用模式；2、TFF1介導miRNA423-5p參與黏膜修復的相關機制及信號通路；3、miRNA423-5p參與TFFs協同表達調控。本課題有助於闡明三葉因子表達調控模式，闡明其在胃腸道黏膜病變中的作用及分子機制，為以TFF1為治療靶點進行以miRNA為新型治療工具的臨床套用提供理論依據。
結題摘要
三葉因子TFF1具有黏膜保護與修復作用，其過程與黏膜上皮細胞的增殖、凋亡以及遷移能力都密切相關，並且TFF1與胃腸道惡性腫瘤發生髮展也具有密切關係。microRNA是基因表達調控網路中關鍵一環，影響著多條信號傳導通路。許多microRNA與胃癌密切相關，可以通過抑制癌基因的表達或負性調節抑癌基因從而影響腫瘤的發生髮展，並且還可以直接以甲基化酶為靶蛋白通過影響甲基化水平參與下游基因的表達調控。本課題擬檢測microRNA對TFF1表達的調控作用，並進一步闡明TFF1因子在胃腸道黏膜病變及胃癌發生髮展中的作用。本課題套用軟體及生物信息平台，對調控TFF1表達的microRNA進行篩選，預測了可能結合在TFF1的5’UTR、3’UTR或CDS區域的microRNA信息。篩選出特異性結合在TFF1的3’UTR 區域的miRNA423-5p，首先套用螢光定量PCR明確TFF1與miRNA423-5p在腫瘤組織和正常組織中的差異性表達；其次，通過轉染miRNA423-5p模擬物或抑制物明確miRNA423-5p對TFF1表達的負調控作用；再次，構建含TFF1的3’UTR區域的報告基因質粒，套用螢光素酶活性實驗檢測證實TFF1是miRNA-423-5p下游靶基因；最後，細胞功能學檢測表明miRNA-423-5p通過負調控TFF1表達誘導細胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin D3及細胞粘附蛋白β-catenin的表達，胃癌細胞中促進增殖並抑制侵襲，胃黏膜細胞中促進細胞增殖，抑制細胞凋亡與遷移。 其次，篩選出特異性結合在TFF1 CDS區的miR218-5p，首先套用螢光定量PCR及免疫組化檢測明確胃癌組織中miR218-5p與TFF1表達呈負相關；其次，驗證胃癌細胞中miR218-5p以TFF1為下游靶基因並負調控其表達；再次，檢測明確miR218-5p下調TFF1的表達及分泌，體內外水平促進胃癌細胞增殖；最後，開展信號通路研究明確miR218-5p依賴Erk1/2通路發揮功能。 綜上，本項目明確了microRNA對TFF1表達的調控作用，即探討了miRNA423-5p與miRNA218-5p對TFF1表達的調控模式及負調控作用；同時，通過體內外水平研究探討TFF1表達變化對胃癌細胞及胃黏膜細胞生物學行為的影響，進一步闡明TFF1因子在胃腸道腫瘤進展以及胃腸道黏膜
