肺癌組織小RNA修飾的特徵分析及調控機制研究

《肺癌組織小RNA修飾的特徵分析及調控機制研究》是依託同濟大學，由閆孟紅擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：肺癌組織小RNA修飾的特徵分析及調控機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：閆孟紅
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

肺癌是一種常見的惡性腫瘤疾病，其發病率逐年上升，嚴重威脅著人類健康。修飾核苷與人類的多種疾病具有非常密切的關係。近年來，DNA甲基化和組蛋白修飾備受人們的關注，而RNA修飾的研究相對非常缺乏，特別是microRNA的修飾。在前期研究中，我們成功的建立了一種基於LC-MS/MS的同時檢測多種修飾核苷的方法，並發現小RNA中存在一系列的修飾。本項目重點研究肺癌組織中小RNA的修飾狀況；研究異常表達的特定3-5種microRNA的修飾狀況及其修飾核苷的定位；探討RNA修飾對肺癌發生、細胞增殖、轉移的作用及機制。本項目的研究將為microRNA修飾的研究奠定良好的基礎，將有助於闡明microRNA的結構和功能，具有較強的創新性；將對肺癌發病機制的研究提供可靠的理論和實驗依據，為肺癌等疾病的診治提供新的思路。

結題摘要

肺癌是我國發病率和死亡率較高的一種惡性腫瘤疾病，它嚴重威脅著人類的健康。小RNA與肺癌的發生髮展具有非常密切的關係，而與肺癌相關的小RNA中存在哪些修飾以及修飾在RNA中的作用方面研究較少。在前期研究中，我們成功的建立了一種基於LC-MS/MS的同時檢測41種核苷的方法，並發現小鼠肝臟小RNA中存在一系列的修飾。以此為基礎，在本項目中我們對肺癌組織及癌旁組織的小RNA進行了分離純化，獲得了tRNA、30-60 nt、10-30 nt 大小等的小RNA；完成了對小RNA的純度檢測工作；並利用LC-MS/MS 技術對這些小RNA中的修飾核苷進行了檢測分析，對不同大小RNA的修飾核苷的表達譜進行了分析。結果發現，在肺癌組織及癌旁組織小RNA中存在多種修飾，並且與癌旁組織相比，肺癌組織的小RNA分子中修飾核苷的含量具有顯著的差異。其中tRNA分子和含有5.8S和5S rRNA的條帶中，修飾核苷Cm的含量均有具有顯著的升高。在30-60nt大小的RNA分子中修飾核苷ac4C的含量也有所升高。這些結果顯示，修飾核苷的水平和疾病存在一定的關聯，這為理解肺癌的發生髮展提供的新的思路。此外，我們利用鏈霉親和素-生物素技術對肺癌組織中的miR-21進行分離、鑑定和純度分析，並利用LC-MS/MS技術對RNA中的修飾核苷進行了檢測分析，發現miR-21中存在較低含量的RNA修飾；我們還建立起一種LC-MS/MS鑑定含有修飾的22nt 左右小RNA分子的方法，並對RNA核苷修飾的生物學功能進行初步的探討，發現修飾在RNA穩定性方面具有重要的作用。本項目研究結果為RNA修飾核苷將來用於研究或診斷肺癌等疾病提供了重要的科學依據。