《p53異構體泛素化的調節機制》是依託蘇州大學，由劉賡擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：p53異構體泛素化的調節機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉賡
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
泛素化廣泛參與細胞內各項生理活動。p53作為最重要的抑癌因子之一，其蛋白穩定性和活性受到泛素化的嚴格調控。隨著p53異構體的被發現，它們在腫瘤產生中的作用也在慢慢被揭示，而對它們自身調控的研究卻幾乎是空白。因此，本課題通過對p53異構體泛素化的研究，找出參與泛素化的因子，探索它們自身穩定性及活性調節的機制，進一步了解它們和野生型p53的相互調控和影響。同時，為研究開發異構體泛素化調節劑提供理論依據，最終達到提高腫瘤放射治療增敏的效果。
結題摘要
抑癌基因p53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的基因之一，約50%的腫瘤中存在p53突變，餘下的腫瘤中，p53信號通路受阻。p53在調節細胞生長周期、DNA修復、細胞衰老或者誘導細胞程式性死亡（凋亡）等方面起著重要作用。通過不同的轉錄翻譯起始位點和RNA選擇性剪接，p53基因一共可以編碼至少12個異構體。臨床數據表明，p53異構體在多種腫瘤中表達異常。目前的研究主要集中N端的異構體上，對於p53 C端異構體的研究很少，p53β或p53γ的獨特生物活性也未見報導，僅有一篇文獻發現p53β可以增強p53缺失型細胞對化療藥物的敏感性。我們首先確定了以p53β為主要研究對象。前期實驗發現，p53β可以抑制p53缺失型腫瘤細胞生長，X射線可以上調p53β表達。但瞬時表達p53β需高度依賴轉染效率。製備穩定表達細胞株時，作為對照，需要同時建立p53的穩定表達細胞株。但是p53持續高表達對於細胞有很大的抑制增殖、促進凋亡的作用，難以獲得穩定表達細胞株。所以，我們引進Tet-On誘導表達系統（Clontech），建立誘導表達細胞株。通過調節細胞中p53β的表達水平，採用CCK8法、克隆形成實驗、流式細胞儀等方法檢測其對細胞增殖、存活、周期等的影響，並用western blotting方法加以驗證，以研究p53β的生物學效應。同時，利用誘導表達細胞，研究p53β泛素化的過程和機制，篩選相關的泛素連線酶E3和去泛素化酶。經過研究，我們發現了： 1. p53β可以抑制p53缺失型腫瘤細胞生長； 2. X射線可以上調p53β表達； 3. p53α和p53β的重新克隆； 4. p53β表達抑制細胞生長； 5. p53β表達促進細胞凋亡； 6. p53β表達不影響細胞周期。以上結果很好的揭示了p53β的對於細胞的作用效應，並且提示了與野生型p53不同的作用機理，為接下來的機制研究打下良好的基礎；同時，誘導表達系統具有背景低、誘導快速且效率高、毒性小、誘導可逆等優點，誘導表達細胞株的建立，為後續實驗提供了強有力的工具。
