《GIT2負調控NF-κB通路及其分子機制》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由於淼擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：GIT2負調控NF-κB通路及其分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：於淼
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
NEMO是NF-κB通路中的關鍵調控分子，通過 K63泛素化修飾在NF-κB的負反饋調節中發揮重要作用；GIT2是一種支架蛋白，本身雖不具有激酶與泛素相關酶活性，但其具有作為平台分子募集不同分子調控信號通路的功能；GIT2敲除的小鼠表型反應了其在機體免疫調節與炎症反應中的重要作用。結合文獻背景及我們的前期研究基礎，我們提出GIT2可能通過募集A20對NEMO去泛素化進行調控，進而負調控NF-κB通路，從而在多種生理病理過程中發揮作用。本項目擬開展系列研究證明上述假設，並初步闡明其生理病理學意義。重點研究：GIT2 與NEMO、A20的作用位點及特徵；GIT2影響NEMO泛素化的分子機制；GIT2負調控NF-κB的生理病理學意義。這對我們深入理解NF-κB信號途徑調節機制、揭示GIT2在腫瘤發生髮展轉移過程中的作用；尋找腫瘤治療的新靶點具有重要的科學意義。
結題摘要
NF-κB(NF-κB)在炎症、免疫、細胞應激和凋亡中扮演重要的角色。NF-κB經典途徑的激活依靠其抑制亞基IκBα的磷酸化,而IκBα是由一個大分子量的多聚複合物調節的，即IκB激酶複合體。IKK激酶複合體是由兩個催化亞基IKKα和IKKβ和一個調節亞基NEMO/IKKг(NF-κB essential modulator)組成。NEMO是IKKs和NF-κB激活所必須的分子，但是它的活性機制還沒有完全闡明。GITs蛋白是近年來發現的具有腳手架功能的一類蛋白質，並且可作為多種信號傳導通路的接頭分子,前期實驗表明，GIT2與NF-κB信號通路中許多關鍵的蛋白分子具有相互作用，我們推測GIT2有可能參與NF-κB信號通路，因此，我們以GIT2基因為主要研究對象，發現與之相互作用的蛋白，探討其影響NF-κB的分子機制。 我們通過一系列體內體外實驗證明GIT2與NEMO存在蛋白質相互作用，且GIT2與NEMO相互作用的位點可能是GIT2的ARFGAP、PBS結構域和NEMO的CC結構域，確定了GIT2(1-347 aa)與TRAF1存在相互作用。我們通過轉錄活性實驗發現，GIT2、A20、TRAF1和NEMO均可以抑制NF-κB的轉錄活性，並且A20、TRAF1均可以和GIT2協同抑制NF-κB的轉錄活性。GIT2可以抑制TRAF2介導的NF-κB的轉錄活性，但不可以抑制IKKβ誘導的NF-κB的轉錄活性。通過複合體實驗表明，GIT2可以促進A20與NEMO的結合併促進A20對NEMO的去泛素化，進而調控NF-κB的下游靶基因的轉錄。本研究為NF-κB的調控機制提供了新的線索。
