《miR17-92在腎臟缺血再灌注中的作用及機制研究》是依託四川大學，由林濤擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR17-92在腎臟缺血再灌注中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：林濤
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腎臟缺血再灌注損傷（IRI）是影響移植腎短期及長期存活的重要因素，其損傷機制尚不清楚。我們發現小鼠腎臟IRI後多個miR-17-92簇的miRNA水平升高；後續實驗發現miR-17-92高表達具有腎臟保護作用，具體機制不明。近來研究發現miR-17-92可以通過抑制凋亡來保護腫瘤細胞，生物信息學分析也發現其能夠直接調控多個凋亡相關蛋白mRNA。因此我們提出在腎IRI中，miR-17-92可能通過抑制腎小管上皮細胞凋亡，改善腎功能。本項目擬首先通過檢測移植腎及血液、尿液標本中miR-17-92表達圖譜，證明miR-17-92與腎IRI的相關性，篩選具有調控作用的miRNA和凋亡因子；再通過細胞及動物實驗驗證miR-17-92在腎IRI的保護作用，確定發揮作用的miRNA，闡明下游具體信號通路，並探索miRNA mimics作腎IRI為潛在分子藥物的可能性。
結題摘要
背景：腎臟移植過程不可避免會經歷缺血再灌注損傷（IRI），不僅造成移植物延遲功能恢復,還可能促進急性排斥反應，減少移植物長期存活。由於腎 IRI 的病理生理機制非常複雜，至今尚未徹底闡明，也沒有有效的預防措施。miRNA是近年來發現的一種短鏈RNA，可以通過轉錄後調控參與多種病理生理機制。我們之前的研究表明缺血再灌注後腎臟自噬水平明顯增加，miR-17-92可能有保護作用。 研究內容：根據小鼠IRI建模後miR-17-92簇內6個miRNA的時間表達譜，篩選出其中兩個表達變化最明顯的miR-17和miR-20a進行後續研究。主要包括：1.動物IRI模型和細胞模型檢測自噬和凋亡水平變化；2. miR-20a及miR-17對於HK-2細胞活力，細胞模型中凋亡及自噬水平的影響；3.通過生物信息學分析及螢光素酶報告篩選miR-17及miR-20a所作用的靶蛋白；4.通過干預下游靶蛋白，觀察細胞模型自噬及凋亡水平變化；5.動物實驗驗證miR-20a及miR-17對於缺血再灌注損傷的保護作用及其所調控的凋亡、自噬水平變化和下游靶蛋白的變化。 重要結果及關鍵數據：1.小鼠IRI模型中，miR-17和miR-20a均明顯高表達；自噬及凋亡水平也明顯上調；細胞模型中miR-17和miR-20a均低表達，但是自噬及凋亡水平也明顯上調；2. miR-17及miR-20a可以明顯提高HK-2細胞的活力，抑制自噬及凋亡，抑制其表達會明顯增加細胞模型凋亡水平；3. 生物信息學分析顯示PTEN,BIM, BMPR2是miR-20a及miR-17的靶蛋白，細胞實驗驗證miR-17和miR-20a處理後PTEN及BIM有明顯下降；螢光素酶報告實驗也證實上述結果；4.上調PTEN及BIM可以拮抗miR-20a和miR-17對於自噬的凋亡的抑制作用；PTEN及BIM的下游信號通路為AKT/Beclin1；5.動物實驗證實miR-17和miR-20a可以保護IRI過程腎臟組織的損傷，抑制自噬及凋亡水平，同時抑制PTEN及BIM的表達。
