miR-214調控宮頸癌細胞增殖與運動的機制研究

《miR-214調控宮頸癌細胞增殖與運動的機制研究》是依託天津醫科大學，由石立瑩擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：miR-214調控宮頸癌細胞增殖與運動的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：石立瑩
• 依託單位：天津醫科大學

中文摘要

微小RNA（miRNA）是一類高度保守的長約22nt的內源性單鏈小RNA分子，與靶mRNA結合可降解mRNA或抑制翻譯，進而在轉錄後水平調控生物體生長發育、細胞分化等諸多過程。在人類700多種miRNA中，已經明確功能的靶基因分子極少。本課題組前期工作中發現miR-214在人類宮頸癌組織和細胞中低表達，並且miR-214可以抑制宮頸癌細胞的增殖與運動。由於miRNA是通過調控靶基因的表達而發揮生物學功能的，我們套用cDNA晶片技術和生物信息學結合的方法篩選到十幾個miR-214的候選靶基因，包括已證明與細胞增殖和運動相關的基因Plexin-B1。本項目在此基礎上進一步確證其候選靶基因，並進行功能分析，以深入研究miR-214抑制宮頸癌細胞增殖和運動的分子機制，為進一步了解miRNA分子在腫瘤發生髮展中的作用奠定理論基礎。

結題摘要

miRNA是一類約22nt大小的非編碼RNA分子，通過與其靶基因的相互作用而對基因表達發揮負性調節的作用。研究已經發現miRNA分子可以發揮癌基因或抑癌基因的作用，參與癌症的發生髮展過程。本課題著重研究miR-214在宮頸癌HeLa細胞中的具體功能，鑑定其下游直接的靶基因，並通過分析靶基因的功能，以期闡明miR-214發揮作用的具體分子機制，從而為有助於理解宮頸癌發生髮展的分子機制，促進開發新的有效的診斷和治療策略。首先，我們利用實時螢光定量PCR技術檢測miR-214在21對宮頸癌及其鄰近正常組織中的表達水平，發現miR-214在宮頸癌組織及宮頸癌HeLa細胞中表達明顯下調；接著，在宮頸癌HeLa細胞中過表達miR-214，利用MTT實驗、生長曲線、克隆形成、細胞劃痕、Transwell遷移和侵襲實驗、細胞生存實驗、藥敏實驗及TUNEL實驗檢測miR-214對HeLa細胞惡性表型的影響；結果證明，過表達miR-214明顯降低HeLa細胞的活性、生長和增殖，遷移和侵襲能力以及細胞的生存能力，增加細胞對化療藥物順鉑的敏感性，而且可以促進細胞的凋亡。然後，通過生物信息學方法結合miRNA表達譜分析，篩選miR-214作用的可能靶基因，並利用螢光報告載體實驗結合實時定量PCR和Western印跡技術驗證miR-214對其靶基因的直接調控作用及其可能的調控方式；結果我們篩選並證實了miR-214發揮作用的兩個直接靶基因——Plexin-B1和Bcl2l2。最後，利用RNA干擾技術，結合上述表型實驗分析干擾靶基因表達後細胞表型的變化，發現RNA干擾Plexin-B1表達後細胞生長與增殖、遷移與侵襲能力均減弱；而RNA干擾Bcl2l2後則使得HeLa細胞的生存能力降低，對順鉑的敏感性增加。總之，我們研究發現了miR-214在宮頸癌組織中呈低水平表達，它通過調節其直接靶基因——Plexin-B1和Bcl2l2的表達而發揮抑癌基因的作用，其中，Plexin-B1主要負責細胞生長與增殖、遷移與侵襲能力的改變，而Bcl2l2參與miR-214引起的細胞生存能力及對順鉑敏感性的變化。這些結果比較系統地闡明了miR-214在宮頸癌中的功能及其作用的分子機制，必將為開發宮頸癌新的診斷和治療手段提供新的選擇。