《p53—miR-509-5p—Mdm2—p53反饋環路影響宮頸癌細胞生長的機制研究》是依託天津醫科大學，由王芳擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：p53—miR-509-5p—Mdm2—p53反饋環路影響宮頸癌細胞生長的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：王芳
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
miRNA是一類調節性小RNA分子。本項目立足尋找宮頸癌中參與p53腫瘤抑制途徑的miRNA。前期工作證實野生型p53在轉錄水平誘導miR-509-5p表達增加，而且在野生型p53的宮頸癌HeLa細胞中，miR-509-5p誘導細胞周期停滯和凋亡增加，抑制細胞生長，發揮抑癌基因作用。並且證實miR-509-5p通過直接靶定並下調Mdm2分子，進而上調p53、p21及bak表達，形成了p53-miR-509-5p-Mdm2-p53正反饋調控環路。我們將進一步套用挽救實驗、裸鼠動物體內實驗及臨床標本研究，完善miR-509-5p對宮頸癌細胞生長增殖的影響。同時，尋找miR-509-5p的核心啟動子及轉錄起始位點，並結合螢光報告載體、EMSA及ChIP等實驗深入分析野生型p53對miR-509-5p轉錄調控的直接性，從而為宮頸癌發生髮展的分子機制提供理論基礎，並為宮頸癌的診斷和治療提供有力線索。
結題摘要
微小RNA（miRNA）是一大類約22nt大小的高度保守的非編碼單鏈RNA分子，對細胞內基因表達進行轉錄後調控。研究已經證實，miRNA參與了包括腫瘤發生髮展在內的多種生理及病理過程。腫瘤抑制蛋白p53是細胞內非常重要的的抑癌基因，通過轉錄調控下游基因如鼠雙微基因Mdm2、p21和bax等來抑制細胞周期或促進細胞凋亡，進而發揮抑癌基因的作用。同時，Mdm2蛋白又可以與p53特異性結合，抑制其反式激活功能或促進p53蛋白的降解，從而對p53蛋白進行負反饋調控，形成p53和Mdm2之間的精細平衡狀態。本項目在研究中發現並證實，p53與Mdm2之間除了直接相互的調控作用外，還可以通過miR-509-5p來進行間接調控：p53可以直接結合在miR-509-5p上游的啟動子區域，在轉錄水平上調其表達；表達增加的miR-509-5p則結合其下游直接靶基因Mdm2的3’UTR區進而抑制其mRNA表達及翻譯。Mdm2表達水平的降低直接解除了其對p53蛋白的負反饋作用，使得p53表達增加，進而導致p53下游直接靶基因p21及bak的表達增加，從而誘導細胞周期停滯及細胞凋亡。同時，我們還發現，在宮頸癌及肝癌組織中，p53和miR-509-5p表達水平明顯偏低，而Mdm2則明顯高於其鄰近正常組織，而且進一步細胞功能學實驗證實miR-509-5p可以抑制宮頸癌和肝癌細胞的生長增殖以及侵襲與遷移能力，同時誘導細胞凋亡及細胞周期停滯於G1期，發揮抑癌基因作用，並且進一步證實這一過程是通過抑制其下游直接靶基因Mdm2實現的。總之，本研究發現miR-509-5p參與了Mdm2/p53通路的調節，並參與了宮頸癌及肝癌的的發生髮展過程，為腫瘤發生髮展的分子機制提供了研究線索。
