《宮頸癌放療敏感性microRNA預測模型的建立及調節機制研究》是依託復旦大學，由吳小華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：宮頸癌放療敏感性microRNA預測模型的建立及調節機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳小華
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
宮頸癌是女性第二位最常見的婦科惡性腫瘤，放療是宮頸癌治療的主要手段之一，放療抵抗是宮頸癌復發的主要原因，約有30%宮頸癌患者因此復發。放療敏感性預測決定了宮頸患者治療的個體化選擇，成為提高宮頸癌患者生存率的關鍵。本課題在既往我們研究宮頸癌放療敏感性相關蛋白EMMPRIN的基礎上，深入探究宮頸癌放療敏感相關蛋白的調節機制，miRNA作為人類mRNA表達調節機制，新近備受關注。採用晶片技術檢測放療敏感與放療抵抗的宮頸癌組織及細胞株中miRNA表達譜的差異，從而篩選出與放療敏感相關的miRNA，建立能預測宮頸癌放療敏感性的預測模型。並用相關miRNA轉染宮頸癌細胞，及用轉染細胞種植於裸鼠，觀察細胞及種植腫瘤放療敏感性變化，篩選出放療敏感相關miRNA作為指導患者個體化治療和靶向生物治療提供依據，並且推測和驗證miRNA影響放療敏感性的機制，為可能的基因治療提供理論依據。
結題摘要
宮頸癌是女性第三位最常見的婦科惡性腫瘤，放療是宮頸癌治療的主要手段之一，放療抵抗是宮頸癌復發的主要原因，約有30%宮頸癌患者因此導致復發。放療敏感性預測決定了宮頸患者治療的個體化選擇，成為提高宮頸癌患者生存率的關鍵。本課題假設miRNA能調節宮頸癌放療敏感性，使用miRNA晶片篩選出不同放療敏感性的宮頸癌的miRNA的表達。Real-time PCR驗證miRNA晶片篩選的結果。選擇放療不敏感的宮頸癌細胞SiHa，放療敏感的宮頸癌細胞Me180作為課題研究的細胞。克隆形成實驗檢測放療敏感性。用慢病毒載體構建穩定轉染miR－181a的穩轉株，體外體內實驗驗證穩定轉染株的放療敏感性。增殖實驗，周期實驗，凋亡實驗檢測miR－181a調節放療敏感性的可能機制。mRNA晶片和生物信息軟體預測miRNA可能的靶基因。雙螢光素酶實驗驗證靶基因。Real－time PCR， western blotting，克隆形成實驗驗證靶基因的表達和功能。miRNA晶片技術篩選11例放療敏感和7例放療抵抗的宮頸癌標本中的miRNA表達譜，篩選出與放療敏感相關的miRNA。結果我們篩選出8個與放療敏感相關的miRNA。挑選miRNA-181a作為我們研究的對象。過表達miR-181a能抑制宮頸癌細胞的放療敏感性，低表達miR-181a能促進宮頸癌細胞的放療敏感性。我們建立表達miR-181a的穩定轉染株種植於裸鼠，體內實驗驗證miR-181a能抑制宮頸癌細胞的放療敏感性。通過mRNA晶片技術和生物信息軟體我們預測miR-181a的作用靶基因，PRKCD成為可能的靶基因。過表達miR-181a能抑制宮頸癌細胞的PRKCD的表達，而低表達miR-181a能增加宮頸癌細胞的PRKCD的表達。抑制宮頸癌細胞PRKCD的表達能抑制宮頸癌細胞的放療敏感性，並且促進宮頸癌細胞的PRKCD的表達能增加宮頸癌細胞的放療敏感性。恢復高表達miR-181a的宮頸癌細胞株中的PRKCD的表達能逆轉miR－181a對宮頸癌細胞株對放療抵抗作用。我們認為miR－181a能通過抑制靶基因PRKCD的表達來抑制宮頸癌的放療敏感性。
