《MicroRNA-210對乏氧腫瘤細胞放射敏感性的影響及其機制研究》是依託蘇州大學，由楊巍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MicroRNA-210對乏氧腫瘤細胞放射敏感性的影響及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊巍
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
乏氧在實體瘤中普遍存在，提高乏氧腫瘤細胞的放射敏感性是提高放療效果的重要途徑。研究發現MicroRNA-210在乏氧條件下以依賴HIF-1α的方式特異高表達，並在乏氧腫瘤細胞增殖、凋亡、血管生成、轉移和DNA損傷修復等過程中起重要作用，可能是產生輻射抗性的重要因素。本研究擬將MicroRNA-210作為提高乏氧腫瘤細胞放射敏感性，增強放射治療療效的新靶點，構建其慢病毒過表達載體和反義表達載體，轉染乏氧培養的肝細胞癌SMMC-7721細胞，探討其過表達或低表達對乏氧腫瘤細胞放射敏感性的影響及其機制，並通過研究其表達水平對裸鼠體內移植瘤放療效果的影響以驗證MicroRNA-210分子靶向治療提高實體瘤放療療效的可行性。
結題摘要
為探討miR-210表達下調對乏氧人肝癌SMMC-7721細胞放射敏感性的影響，利用分子生物學技術構建miR-210反義和隨機寡核苷酸慢病毒載體，經慢病毒轉染建立穩定轉染miR-210反義和隨機寡核苷酸的人肝癌SMMC-7721細胞株。以實時定量RT-PCR檢測乏氧SMMC-7721細胞HIF-1α mRNA表達和miR-210表達，以四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測細胞增殖活性，流式細胞術檢測細胞周期和細胞凋亡，克隆存活實驗檢測細胞放射敏感性的變化。結果表明，SMMC-7721細胞乏氧培養後HIF-1α和miR-210表達隨時間逐漸增加，穩定轉染miR-210反義寡核苷酸能明顯下調miR-210在乏氧細胞的表達；下調miR-210表達明顯抑制乏氧SMMC-7721細胞體外增殖活性，誘導G1期阻滯，促進細胞凋亡，提高乏氧SMMC-7721細胞放射敏感性，放射增敏比約為1.21。上述結果提示，下調miR-210表達可抑制乏氧SMMC-7721細胞體外增殖，誘導凋亡，增強其放射敏感性。為研究敲低miR-210聯合放療對裸鼠體內移植人肝癌細胞SMMC-7721的抑瘤效應，將穩定轉染miR-210反義序列和隨機序列的人肝癌細胞SMMC-7721接種於裸鼠。待各組裸鼠腫瘤直徑達到6-8mm，檢測各組裸鼠miR-210和相關蛋白表達；24 h後各組裸鼠腫瘤局部在常氧或乏氧條件下接受8 Gy 60Co γ射線照射，檢測各組裸鼠放療後不同時間的腫瘤體積；照後24 h用免疫組化染色檢測腫瘤細胞增殖活性和腫瘤間質微血管密度，用TUNEL法檢測肝癌細胞凋亡率。結果表明，miR-210敲低組的miR-210和乏氧誘導因子-1α表達明顯低於對照組；miR-210靶基因蛋白表達明顯高於對照組；照射後9-30天，miR-210敲低常氧或乏氧照射組的腫瘤體積分別明顯小於隨機序列常氧或乏氧照射組；照射後24 h，miR-210敲低常氧或乏氧照射組的腫瘤細胞增殖活躍度和腫瘤間質微血管密度分別明顯低於隨機序列常氧或乏氧照射組，細胞凋亡率則明顯升高。上述結果提示，miR-210敲低可提高裸鼠移植人肝癌的放療效果。
